前列腺癌相关lincRNAs功能的生物信息学分析

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长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度大于200核苷酸、不具备蛋白编码能力的转录本。目前为止,了解确切功能的lncRNA数量极少。前列腺癌症是发生在男性生殖系统中的一种恶性肿瘤,它也是男性最重要的致死肿瘤之一。随着癌症转录组研究的进展,越来越多的证据显示,lncRNA的异常表达参与了肿瘤的发生。故而lncRNA的研究十分重要。根据在基因组位置的不同,lncRNA可分为不同的亚类,其中基因间的lncRNA则转录自基因间区域,即长链非编码间区RNA(Long intergenic non-coding RNAs, lincRNAs)是本文的探索的对象。我们使用下一代测序(NGS)的数据,共计30个RNA-Seq样本(20个癌症样本,10个癌旁正常组织),使用加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression networkanalysis,WGCNA)的方法对差异表达的蛋白编码基因和lincRNA数据进行共表达分析。我们对这5000个高度差异基因建立共表达scale-free网络并进行聚类分析,获得9个共表达模块,分别命名为M1M9。我们对表达矩阵进行主成分分析(principalcomponent analysis,PCA),并将第一主成分作为整个模块的eigengene,然后用eigengene的表达值代表整个模块的总体表达。计算了每个基因与eigengene的Pearson’s correlation,作为此基因的的模块关联系数(即module membership kME)。得到前列腺癌共表达模块后,检验所有模块是否与前列腺癌症相关的显著性,得到三个前列腺癌相关的风险模块M1(blackpcor=0.008219622);M3(cyanpcor=0.027801588);M5(magenta pcor=0.001489048)。模块M3(“cyan”)和模块M5(“magenta”)的eigengenes的聚类分析结果表明这两个模块接近。我们对这三个前列腺癌风险模块(M1, M3,M5)进行子网络分析,发现在M3,M5模块中lincRNA含量较多。另外在eigengenes的转录因子(transcription factor,TF)富集分析结果表明M3和M5模块共同被重要的癌症调控因子Sp1调控,miRNAs富集分析结果表明模块分别和miR-24和miR-330显著相关(pvalue<=0.05),根据相关已报道文献可知miR-24和miR-330是前列腺癌症的的生物标志物。在对M3模块网络的研究中发现,前列腺癌风险模块M3(“cyan”)中有7个lincRNA (TCONSl200008237、 TCONSl200022670、TCONSl200022611、 linc-PXN-1、 TCONSl200011130、 TCONSl200001418、TCONSl200013175)起着重要调控基因共表达的作用,故而在网络的层次上又验证了lincRNA的生物学功能,我们把这个模块中的eigengene基因在MetaCore GeneGO中进行富集分析,发现M3(”cyan”)模块内的基因主要参与转录调控,细胞内蛋白运输定位,基因表达,衰变等生物过程。所有的结果皆证明了lincRNA在前列腺癌中行使相关调控的功能。本课题通过一系列的生物信息学方法,阐明了lincRNA如何同蛋白编码基因共表达,并行使相关特定的功能;可作为指导性资源,为研究者研究lncRNA提供新的思路和方式。
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