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肿瘤是目前威胁人类健康的重大疾病,尚无有效治疗方法。很多临床药物经常产生耐药性和毒副作用,因此从中药天然产物中寻找新型抗肿瘤药物展示了良好的应用前景。本文以膀胱癌为靶点,系统研究了几种天然化合物的抗肿瘤效应,重点揭示了木香烯内酯和血竭素高氯酸盐促进膀胱癌凋亡的分子机制。在本论文中,我们首先研究了包括倍半萜内酯类(木香烯内酯,异土木香内酯和altholactone),生物碱类(吴茱萸碱)以及三萜式皂甙(土贝母皂甙-1),血竭素高氯酸盐六种天然化合物,对人膀胱癌T24细胞系的细胞活性及细胞凋亡的影响。通过MTT实验,检测六种天然化合物成分(木香烯内酯,异土木香内酯,altholactone,吴茱萸碱,血竭素高氯酸盐和土贝母皂甙-1)对T24细胞的抗增殖作用,发现六种天然化合物对T24细胞的增殖具有抑制作用,且呈现剂量性依赖。其中,吴茱萸碱(IC5。15 μM)对T24细胞的生长抑制效应最强,之后依次是土贝母皂甙-1(IC5022.5 μM),异土木香内酯(IC50 28.8 μM),altholactone(IC50 43.5μM)和木香烯内酯(IC50 46.5μM)血竭素高氯酸盐(IC5。80.7μM)。我们从六种天然化合物中筛选出木香烯内酯,血竭素高氯酸盐,对其抑制膀胱癌T24细胞系的细胞增殖的分子机制进行深入研究。通过细胞生存能力实验(钙黄绿素-AM(Calcein-AM),碘化丙啶(PI)染色),确定了木香烃内酯,血竭素高氯酸盐对T24细胞的增殖抑制效应。运用流式细胞术,证明木香烯内酯,血竭素高氯酸盐促进T24细胞凋亡,且呈剂量性依赖性。活性氧ROS重要的胞内信号级联的传递分子。体内过多的ROS能够引起细胞的氧化应激反应,诱导细胞功能丧失以及凋亡过程。利用荧光染料2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCF-DA)检测经药物处理的T24细胞内ROS的变化,结果表明,木香烯内酯,血竭素高氯酸盐诱导的膀胱癌T24细胞的凋亡与活性氧ROS上调以及线粒体膜电位改变有关,其作用可被ROS特异性抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)所阻断。促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2两者之间的相对比例参与调节细胞内线粒体凋亡途径的调节,表现为调节从线粒体膜通透性增加和细胞色素C释放后的Caspases级联反应激活和细胞凋亡的全过程。蛋白免疫印迹检测表明,木香烃内酯,血竭素高氯酸盐导致人膀胱癌T24细胞系Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白和survivin蛋白表达下降,并显著促进了 caspase-3蛋白及其下游靶蛋白PARP的剪切活化。所以,本论文阐述了六种天然化合物对膀胱癌细胞增殖具有抑制作用,重点揭示了木香烃内酯,血竭素高氯酸盐抑制膀胱癌细胞增殖的深层分子机制,为这些天然化合物在膀胱癌治疗的潜在应用提供了的理论基础。