宫颈癌是最常见的女性恶性肿瘤之一,其发生与人乳头瘤病毒(human papilloma virus, HPV),尤其是HPV16,18感染密切相关。目前基于HPV18的治疗性疫苗针对的靶蛋白主要为早期蛋白E6或E7,这些疫苗有一定的疗效。但最近的研究也发现:机体对高危型HPV病毒(HPV16、HPV18)E6、E7蛋白的免疫反应与病变的自行消退没有必然联系,这或许是因为E6、E7的高表达是在晚期病变组织中,而在感染初期和宫颈上皮内瘤变发生的早期,它们的表达被E2蛋白所抑制。相反,E2蛋白作为病毒DNA复制和基因表达的主要调控蛋白,在感染初期和宫颈上皮内瘤变(CIN)早期稳定表达,且表达率较高。由此可以设想:若以HPV18 E2蛋白为靶点,或许能够在HPV18所致疾病的早期及时阻断病变的进一步发展。基于以上假设,我们设计了本研究课题。细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte ,CTL)在机体抗肿瘤和抗病毒的免疫过程中担负重要角色,在抗原刺激和相应的细胞因子诱导下,能够迅速增殖、分化,执行特异性杀伤功能,是设计治疗性疫苗的理论基础。设计HPV18 E2相关疫苗,诱导针对该蛋白的特异性CTL活化,阻断HPV18所致病变,将成为新的治疗方法。完整的HPV18 E2蛋白除包含CTL表位外,还包含了B细胞表位、Th细胞表位等多种表位,若以完整蛋白做为治疗性疫苗,一方面使表位的针对性不强,另一方面,“免疫偏离”(immune deviation)、“免疫反转”(immune subvertion)等现象均提示:这些表位间可能相互抑制,导致抗原性消减。所以,仅以E2蛋白CTL表位为基础,设计制备的治疗性疫苗效果可能会更好。基于此思想,本文从HPV18 E2蛋白的CTL表位设计出发,体外诱导特异性CTL,同时构建表达E2蛋白的靶细胞模型,最后评估该特异性CTL对靶细胞的杀伤效应。并结合临床,研究HPV18 E2基因在宫颈癌及癌前病变中的表达,为构建多肽疫苗打基础。本研究主要由2部分组成:第一部分HPV18E2蛋白CTL表位合成,靶细胞的构建及杀伤效应的研究基于量化基序法确定E2蛋白的CTL表位,选取结合系数最高的2条九肽和1条十肽作为候选表位。三条多肽由上海再创生化有限公司采用Fmoc固相合成法合成。