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[背景]膀胱癌是泌尿系统最常见的肿瘤之一,当膀胱癌发展到肌层浸润期后,患者预后极差,即使经过规范治疗,5年生存率也仅为60-70%。对膀胱癌患者进行早期诊断和早期治疗,能够控制或延缓其病情进入肌层浸润期,使其生存获益。因此,深入研究膀胱癌发生进展的分子机制并寻找有效的早期诊断、控制治疗和术后监测手段,具有非常重要的临床意义。近年的研究表明microRNA(miRNA)在膀胱癌发生进展中可能发挥重要作用,有可能成为膀胱癌不同分期的新标志物以及预后生存期的新预测指标。miRNA长度约为21-25个碱基,是一种生物体内普遍存在的非编码微小RNA。人类miRNA目前已经发现有700余种,参与调控了近1/3的人类基因表达过程,影响着生命过程的多个方面,是一种重要的转录后调控方式。本研究以miRNA-490家族为着眼点,旨在研究阐明其在膀胱癌发生进展中的作用及可能的通路,加深miRNA对膀胱癌发生及由非肌层浸润性向肌层浸润性进展机制的认识。这将有助于从分子水平上探索膀胱癌的治疗新靶点,早期、全程的控制膀胱癌病程的进展。[目的]探讨miR-490家族对膀胱癌细胞EJ和RT4生物学行为的影响及其对膀胱癌细胞发生发展的作用,并对其分子机制和信号通路进行深入的研究。[方法]1.在膀胱癌细胞系EJ和RT4中应用qPCR检测miR-490的基础表达含量;2.Transwell实验和划痕愈合实验检测miR-490家族对膀胱癌细胞侵袭和迁移能力的影响;3.CCK8法检测miR-490家族对膀胱癌细胞增殖能力变化的影响;4.运用生物信息学的方法预测miR-490家族可能的靶基因;5.应用qPCR检测转染后膀胱癌细胞中miR-490家族表达变化以及可能靶基因和相关基因的表达变化;6.应用蛋白质免疫印迹实验检测miR-490家族对可能靶基因蛋白和相关蛋白表达的影响。[结果]1.RT4细胞相较于EJ细胞miR-490的基础表达水平较低;2.Transwell实验检测细胞侵袭能力的结果为:在EJ和RT4细胞中miR-490-5p模拟物转染组侵袭能力均高于对照组,在RT4细胞中miR-490-3p模拟物转染组侵袭能力高于对照组,miR-490-3p抑制物转染组侵袭能力低于对照组;划痕愈合实验检测细胞迁移能力的结果为:在EJ细胞中miR-490-5p/3p模拟物组细胞划痕面积低于对照组,miR-490-5p/3p抑制物组细胞划痕面积高于对照组;在RT4细胞中miR-490-5p/3p抑制物组划痕面积高于对照组;3.CCK-8法检测细胞增殖能力的结果为:在EJ和RT4细胞中miR-490-5p/3p模拟物组细胞增殖能力高于对照组,在EJ细胞中miR-490-5p/3p抑制物组细胞增殖能力低于对照组,在RT4细胞中miR-490-3p抑制物组细胞增殖能力低于对照组;4.TargetScan 7.1数据库和miRDB数据库预测hnRNPA1是miR-490可能的靶基因之一;5.qPCR检测miR-490及相关基因表达变化结果:在EJ和RT4细胞中,miR-490-5p/3p模拟物组miR-490表达水平均高于对照组,miR-490-5p/3p抑制物组miR-490表达水平均低于对照组;在EJ细胞中,miR-490-5p/3p模拟物组hnRNPA1表达水平高于对照组,而在RT4细胞中,miR-490-5p/3p模拟物组hnRNPA1表达水平低于对照组,miR-490-5p抑制物组hnRNPA1表达水平高于对照组;在EJ和RT4细胞中,miR-490-5p/3p模拟物组Kras表达水平均高于对照组;6.蛋白质免疫印迹实验检测相关蛋白表达情况结果为:在EJ和RT4细胞中,miR-490-5p/3p模拟物组Kras蛋白表达水平升高,miR-490-5p/3p抑制物组Kras蛋白表达水平降低;在EJ细胞中miR-490-5p/3p抑制物组N-cadherin表达升高,E-cadherin表达降低;在RT4细胞中miR-490-5p/3p模拟物组N-cadherin,E-cadherin表达降低。[结论]1.不同膀胱癌细胞系的miR-490基础表达情况不同,可能是影响膀胱癌细胞恶性程度的因素之一;2.miR-490家族能促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭能力;3.miR-490家族调控膀胱癌细胞生物学行为和信号通路是通过作用于hnRNPA1和Kras实现的;4.miR-490家族能影响膀胱癌细胞上皮-间叶转化(EMT);5.miR-490家族在膀胱癌发生进展过程中扮演癌基因的角色。