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目的:本实验主要研究Kisspeptin参与调控子宫内膜蜕膜化,并探讨其在复发性流产发病中的作用及潜在机制。方法:1.临床研究:免疫组化及Western-blot方法检测32例不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)患者与 34 例正常早孕女性绒毛及蜕膜组织中kisspeptin、p-ERK、ERK蛋白水平表达,蜕膜组织中IGFBP-1、dPRL蛋白水平表达。2、动物实验:(1)建立自然流产模型 CBA/J×DBA/2及正常妊娠模型CBA/J×BALB/c,分别于妊娠第9d和14d处死孕鼠计数吸收(流产)胚胎数,取出妊娠第9天孕鼠子宫蜕膜组织及胎盘组织进行kisspeptin、p-ERK、ERK、IGFBP-1、dPRL的免疫组织化学染色及Western-blot检测。(2)上述自然流产模型孕鼠随机分为实验组1、实验组2与对照组,自受孕之日起隔日尾静脉注射kisspeptin多肽100nmmol/kg(2.6μg/只)为实验组 1(Kisspeptin peptide,KP)、注射 kisspeptin 受体阻滞剂 100nmol/kg(2.6μg/只)为实验组 2(Kisspeptin receptor blocker,KB),注射等量的注射用生理盐水孕鼠为对照组(NS)。分别于妊娠第9d和14d处死孕鼠计数吸收(流产)胚胎数,比较各组之间的差异,取出妊娠第9d孕鼠子宫蜕膜组织及胎盘组织进行 kisspeptin、p-ERK、ERK、IGFBP-1、dPRL 的免疫组织化学染色及 Westem-blot检测,并观察添加kisspeptin后对p-ERK、ERK、IGFBP-1、dPRL表达的影响及kisspeptin受体被阻断后对p-ERK、ERK、IGFBP-1、dPRL表达的影响。结果:1、RSA患者绒毛kisspeptin、p-ERK的表达均明显低于正常妊娠者(P<0.05);蜕膜组织kisspeptin、p-ERK、IGFBP-1、dPRL的表达明显低于正常妊娠者(P<0.05),而ERK的表达在绒毛和蜕膜中均无明显差异(P>0.05)。2、自然流产模型CBA/J×DBA/2与正常妊娠模型CBA/J×BALB/c相比,前者妊娠第 9d 和 14d 胚胎吸收率均高于后者(29.17%±2.35%vs 9.13%±1.90%/9d,30.00%±2.65%vs 8.20%±1.64%/14d)(P<0.05)。同时 CBA/J× DBA/2 小鼠母胎界面kisspeptin、p-ERK、IGFBP-1、dPRL 的表达均明显低于 CBA/J×BALB/c 小鼠(P<0.05),而ERK的表达在母胎界面无明显差异(P>0.05)。3、外源性补充kisspeptin可使CBA/J×DBA/2小鼠胚胎吸收率下降,与生理盐水对照组相比(7.30%士 1.18%vs 28.70%±1.95%/9d,10.41%±2.07%vs 27.29%±3.06%/14d)(p<0.01)。并检测到母胎界面p-ERK、IGFBP-1、dPRL的表达增强(P<0.05)。阻断kisspeptin受体后CBA/J×DBA/2小鼠胚胎吸收率变化与生理盐水对照组相比差异无统计学差异(28.03%±2.53%vs 28.70%±1.95%/9d,29.27%±3.01%vs 27.29%±3.06%/14d)(p>0.05)。但检测到母胎界面p-ERK、IGFBP-1、dPRL 的表达下降(P<0.05)。结论:1、RSA患者母胎界面kisspeptin表达下降,提示kisspeptin表达异常与RSA患者流产发病有关。2、复发性流产患者伴随着蜕膜kisspeptin表达降低,p-ERK、蜕膜化标志物(IGFBP-1、dPRL)也呈现低表达。3、动物实验中验证,给予kisspeptin后蜕膜化指标得到改善,上调p-ERK的表达,降低流产率,我们推测kisspeptin可调控子宫蜕膜化,这种调控作用可能是通过ERK1/2信号分子得以实现,kisspeptin低表达可能导致蜕膜化不良引起流产发生。