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目的霰粒肿是我国低龄儿童最常见的眼表疾病之一。睑板腺导管开口阻塞与睑板腺上皮过度角化关系密切,是导致霰粒肿的主要原因,但具体机制尚不清楚。研究发现上皮细胞的过度角化与维生素A(Vitamin A,VA)缺乏相关。我们前期研究发现霰粒肿儿童血清维生素A水平明显低于正常儿童,故推测VA缺乏可能通过睑板腺中其核受体通路,对下游某些维持上皮正常角化基因的表达产生影响。这一过程可能是睑板腺上皮发生过度角化的一个新机制。方法采用SD大鼠建立边缘性维生素A缺乏(Marginal Vitamin A Deficiency,MVAD)动物模型,分离其睑板腺组织进行研究。采用HE染色观察睑板腺组织形态结构,PCR检测MVAD与正常SD大鼠VA核受体各亚型的基因表达水平,免疫荧光及Western blot检测VA核受体各亚型在睑板腺的表达及分布。明确睑板腺中VA核受体的主要亚型分布及其信号通路。建立MVAD动物模型,随机分组为:MVAD组及VA补充(Vitamin A Supplement,VAS)组。采用免疫荧光法检测VAN组、MVAD组及VAS组大鼠睑板腺中VA核受体上游调节蛋白CRABP2和FABP5的表达及定位。采用Illumina技术对各VAN、MVAD及VAS组睑板腺组织进行高通量基因测序,分析差异表达基因,通过DAVID数据库获得差异表达基因的基因本体(Gene Ontology,GO)富集分析,明确与上皮角化相关的目的差异基因。最后采用q PCR验证差异基因表达情况。结果采用经典维生素A缺乏饲料喂养SD大鼠能成功并稳定地构建MVAD动物模型。HE染色显示MVAD组睑板腺导管上皮厚度变薄(P<0.05),分泌细胞细胞核减小(P<0.01)。MVAD组大鼠睑板腺睑板腺上皮角化过度明显,导管中角质透明蛋白颗粒增多。VAN及MVAD大鼠睑板腺中均能检测到RAR-α、-β、-γ,RXR-α、-β、-γm RNA的表达,RXR-αm RNA表达量最高,MVAD可致其表达明显下调。免疫荧光显示VA核受体均呈核表达:VAN组睑板腺腺泡细胞细胞核内RAR-α、RAR-γ、RXR-α、-β、-γ均有表达;导管上皮细胞仅有有RXR-γ表达。MVAD组中只有RAR-α、RXR-α和RXR-γ表达阳性,导管上皮细胞无RARs及RXRs蛋白表达。WB结果显示:RAR-α、RAR-γ,RXR-α、RXR-β、RXR-γ受体蛋白在VAN及MVAD大鼠睑板腺中均有表达,但RAR-β蛋白几乎没有表达,MVAD大鼠睑板腺中RXR-α和RXR-γ蛋白表达较VAN大鼠明显明显下降(P<0.01)。在睑板腺腺泡细胞中,FABP5主要在细胞质中表达,CRABP2在细胞质及细胞核内均有表达。MVAD引起的CRABP2/FABP5相对表达量增高;MVAD给予VA补充后CRABP2/FABP5相对表达量降低。Illumina高通量基因测序异基因分析显示:MVAD组与VAN组差比较:差异基因中上调基因1531个,下调基因1508个。MVAD与VAS组比较:差异基因中上调基因453个,下调基因355个。差异基因GO富集分析与角化相关的差异基因Krt1、Krt7、Krt8、Krt10、Krt16、Krt17差异显著性最高。经q PCR验证后,MVAD引起Krt1、Krt7、Krt8、Krt10、Krt16、Krt17的表达下调,Krt17表达增强。MVAD大鼠给予VA补充至外周血清VA水平正常时,Krt1、Krt7、Krt8、Krt10、Krt16基因表达水平仍未恢复,Krt17基因表达水平恢复正常。结论经典维生素A缺乏饲料建立SD大鼠的MVAD模型稳定性、重复性高。SD大鼠睑板腺组织结构与人睑板腺组织结果具有高度相似性,适于用于人类睑板腺相关疾病的基础研究。MVAD导致睑板腺腺泡细胞过度成熟,角化过度,角质颗粒增加可能通过与角化相关基因调控有关。VA通过CRABP2/FABP5相对表达量调控,经RXR-α核受体信号通路,调节Krt基因表达水平,是VA调控睑板腺上皮正常角化过程的主要机制。