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虫媒病毒(Arbovirus)是一类以吸血昆虫为传播媒介的病毒,通过吸血昆虫叮咬人、家畜及野生动物而传播疾病,具有自然疫源性。该类病毒能引起烈性的人兽共患病,导致大量人畜患病或死亡,造成巨大经济损失的同时也严重威胁公共卫生安全。病原生态学及流行病学研究数据显示,我国目前存在为数众多的虫媒病毒,为有效开展虫媒病毒病的侦检,进而在我国防控该类疫病的发生和流行,建立早期的快速、敏感、特异的实验室检测方法至关重要。与人类疾病关系密切的虫媒病毒主要集中于披膜病毒科、黄病毒科、布尼亚病毒科和呼肠孤病毒科的某些成员。本研究通过对披膜病毒科的委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)nsp1基因、黄病毒科的蜱传脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus,TBEV)NS1基因、布尼亚病毒科的新疆出血热病毒(Xinjiang hemorrhagic fever Virus,XHFV)S基因序列进行保守性分析,各设计出一套能分别检测这三种病毒所有亚型的特异性PCR引物和Taqman探针。以体外转录制备的RNA为模板,通过反应体系和条件优化,分别建立了检测这三种虫媒病毒的一步法荧光定量RT-PCR方法,三种方法的扩增效率分别为:VEEV 98.1%、TBEV 98.4%、XHFV100%。对体外转录的RNA模板检测表明:VEEV荧光定量RT-PCR方法的检测灵敏度达到3.27×102拷贝/μl,TBEV检测灵敏度达到5.82×102拷贝/μl,XHFV检测灵敏度达到9.80×102拷贝/μl。与针对上述病毒的普通PCR方法相比,本研究中三种方法的检测灵敏度高于已报道的现有方法或与之相当。特异性实验结果显示,三种方法均具有良好的特异性,与引起相似症状或与目标病毒同源性较高的同属病毒不产生非特异性扩增。本研究建立的上述检测方法为相关疫病的流行病学调查、监测和快速诊断提供了有效的技术手段。