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目的：糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是最常见的糖尿病眼部微血管并发症，为成人致盲的主要原因。视网膜新生血管是该病增生期的重要病理标志，也是治疗的靶标。目前主要的药物治疗为玻璃体内注射抗血管内皮生长因子药物。从中药中寻找和发现治疗药物具有可行性。本课题选用临床治疗糖尿病视网膜病新生血管的常用中药栀子进行深入研究。试图从中发现有效先导化合物。
方法：（1）对栀子粗提物进行活性分析。采用MTT法检测粗提物多部位作用于人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的半数抑制浓度，设置合理的浓度梯度分析对血管内皮细胞生长因子（VEGF）诱导HUVEC的增殖的抑制作用，寻找栀子中可以抑制内皮细胞增殖的有效部位。（2）综合运用硅胶、ODS、Sephadex LH-20以及高效液相等色谱技术，对石油醚部位进行分离纯化，结合化合物的理化性质和波谱数据鉴定化学结构。（3）探究化合物对VEGF诱导的HUVEC细胞增殖、迁移的抑制作用。
结果：（1）石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位都对VEGF诱导的HUVEC细胞的增殖具有一定的抑制作用。其中，石油醚部位PE-1、PE-2、PE-3和PE-4能浓度依赖性地抑制VEGF诱导的HUVEC增殖，与VEGF对照组相比，差别具有显著性（**P＜0.01，***P＜0.001）。乙酸乙酯部位EA-1、EA-2、EA-3、EA-4、EA-5、EA-6在测试浓度范围内均对抗VEGF诱导的HUVEC细胞增殖，与VEGF对照组相比，差异有显著性（**P＜0.01，***P＜0.001）。EA-1、EA-2显示出较强的抑制作用。正丁醇部位n-BA-1、n-BA-2、n-BA-3、n-BA-4、n-BA-5在测试浓度范围内均对抗VEGF诱导的HUVEC细胞增殖，与VEGF对照组相比，差异具有显著性（**P＜0.01，***P＜0.001）。且n-BA-1有较明显的浓度依赖性。
（2）从栀子石油醚部位分离得到11个化合物，鉴定了其中10个结构。它们分别为邻苯二甲酸二丁酯（1）、Geniposide（2）、Silphanolic Acid C（3）、Epijasminoside A（4）、Jasminoside A（5）、3-hydroxyl-6-hydroxymethyl-1,1,5-trimethylcyclohex-4-O-β-D-glucopyranoside（6*）、Jasminoside C（7）和Genipin-gentiobioside（8）、1-O-β-D-吡喃葡萄糖-（2S，3S，4R，8E）-2-[（2′R）-2′-羟基棕榈酰胺]-8-十八烯-1，3，4-三醇（9）和3β，6β，19α，23-tetrahydroxyolean-12-en-28-oic acid（10）。其中化合物6＊为新化合物，3、9、10为首次从栀子中分离得到。
（3）在化合物对抗VEGF诱导的HUVEC细胞增殖、迁移实验中，发现其中1、2、3、7的抑制作用在观察浓度范围内显示出浓度依赖性作用。抑制作用的IC50分别为13.38±1.75μmol/L（1）、46.34±0.50μmol/L（2）、16.65±1.20μmol/L（3）、24.46±0.33μmol/L（7）和34.25±2.40μmol/L（8）。化合物1、3、4、5、7、8能够抑制VEGF诱导HUVEC迁移，与VEGF对照组相比，差异具有显著性（*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001）。抑制作用的IC50分别为6.97±0.55μmol/L（1）、1.03±0.43μmol/L（3）、48.37±1.23μmol/L（4）、65.35±0.78μmol/L（5）、2.34±0.27μmol/L（7）、3.58±1.24μmol/L（8）。
结论：（1）栀子石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位都对VEGF诱导的HUVEC细胞的增殖具有一定的抑制作用。（2）从石油醚有效部位中分离得到11个成分，鉴定了其中10个的结构，它们分别为：邻苯二甲酸二丁酯（1）、Geniposide（2）、Silphanolic Acid C（3）、Epijasminoside A（4）、Jasminoside A（5）、3-hydroxyl-6-hydroxymethyl-1,1,5-trimethylcyclohex-4-O-β-D-glucopyranoside（6＊）、Jasminoside C（7）、Genipin-gentiobioside（8）、1-O-β-D-吡喃葡萄糖-（2S，3S，4R，8E）-2-[（2′R）-2′-羟基棕榈酰胺]-8-十八烯-1，3，4-三醇（9）、3β，6β，19α，23-tetrahydroxyolean-12-en-28-oic acid（10），化合物6*为一个新化合物。（3）化合物1、3、7、8对于VEGF诱导的HUVEC细胞增殖、迁移具有不同程度的抑制作用；2有效抑制了细胞的增殖，而4、5主要表现出对细胞迁移的抑制作用。
方法：（1）对栀子粗提物进行活性分析。采用MTT法检测粗提物多部位作用于人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的半数抑制浓度，设置合理的浓度梯度分析对血管内皮细胞生长因子（VEGF）诱导HUVEC的增殖的抑制作用，寻找栀子中可以抑制内皮细胞增殖的有效部位。（2）综合运用硅胶、ODS、Sephadex LH-20以及高效液相等色谱技术，对石油醚部位进行分离纯化，结合化合物的理化性质和波谱数据鉴定化学结构。（3）探究化合物对VEGF诱导的HUVEC细胞增殖、迁移的抑制作用。
结果：（1）石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位都对VEGF诱导的HUVEC细胞的增殖具有一定的抑制作用。其中，石油醚部位PE-1、PE-2、PE-3和PE-4能浓度依赖性地抑制VEGF诱导的HUVEC增殖，与VEGF对照组相比，差别具有显著性（**P＜0.01，***P＜0.001）。乙酸乙酯部位EA-1、EA-2、EA-3、EA-4、EA-5、EA-6在测试浓度范围内均对抗VEGF诱导的HUVEC细胞增殖，与VEGF对照组相比，差异有显著性（**P＜0.01，***P＜0.001）。EA-1、EA-2显示出较强的抑制作用。正丁醇部位n-BA-1、n-BA-2、n-BA-3、n-BA-4、n-BA-5在测试浓度范围内均对抗VEGF诱导的HUVEC细胞增殖，与VEGF对照组相比，差异具有显著性（**P＜0.01，***P＜0.001）。且n-BA-1有较明显的浓度依赖性。
（2）从栀子石油醚部位分离得到11个化合物，鉴定了其中10个结构。它们分别为邻苯二甲酸二丁酯（1）、Geniposide（2）、Silphanolic Acid C（3）、Epijasminoside A（4）、Jasminoside A（5）、3-hydroxyl-6-hydroxymethyl-1,1,5-trimethylcyclohex-4-O-β-D-glucopyranoside（6*）、Jasminoside C（7）和Genipin-gentiobioside（8）、1-O-β-D-吡喃葡萄糖-（2S，3S，4R，8E）-2-[（2′R）-2′-羟基棕榈酰胺]-8-十八烯-1，3，4-三醇（9）和3β，6β，19α，23-tetrahydroxyolean-12-en-28-oic acid（10）。其中化合物6＊为新化合物，3、9、10为首次从栀子中分离得到。
（3）在化合物对抗VEGF诱导的HUVEC细胞增殖、迁移实验中，发现其中1、2、3、7的抑制作用在观察浓度范围内显示出浓度依赖性作用。抑制作用的IC50分别为13.38±1.75μmol/L（1）、46.34±0.50μmol/L（2）、16.65±1.20μmol/L（3）、24.46±0.33μmol/L（7）和34.25±2.40μmol/L（8）。化合物1、3、4、5、7、8能够抑制VEGF诱导HUVEC迁移，与VEGF对照组相比，差异具有显著性（*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001）。抑制作用的IC50分别为6.97±0.55μmol/L（1）、1.03±0.43μmol/L（3）、48.37±1.23μmol/L（4）、65.35±0.78μmol/L（5）、2.34±0.27μmol/L（7）、3.58±1.24μmol/L（8）。
结论：（1）栀子石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位都对VEGF诱导的HUVEC细胞的增殖具有一定的抑制作用。（2）从石油醚有效部位中分离得到11个成分，鉴定了其中10个的结构，它们分别为：邻苯二甲酸二丁酯（1）、Geniposide（2）、Silphanolic Acid C（3）、Epijasminoside A（4）、Jasminoside A（5）、3-hydroxyl-6-hydroxymethyl-1,1,5-trimethylcyclohex-4-O-β-D-glucopyranoside（6＊）、Jasminoside C（7）、Genipin-gentiobioside（8）、1-O-β-D-吡喃葡萄糖-（2S，3S，4R，8E）-2-[（2′R）-2′-羟基棕榈酰胺]-8-十八烯-1，3，4-三醇（9）、3β，6β，19α，23-tetrahydroxyolean-12-en-28-oic acid（10），化合物6*为一个新化合物。（3）化合物1、3、7、8对于VEGF诱导的HUVEC细胞增殖、迁移具有不同程度的抑制作用；2有效抑制了细胞的增殖，而4、5主要表现出对细胞迁移的抑制作用。