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【实验目的】本实验旨在观察通过与牙周膜成纤维细胞(Periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)间接共培养,诱导大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向PDLFs分化的可行性。初步探讨PDLFs诱导BMSCs分化的机制:细胞间接触是否为必要条件,如果不接触能否诱导BMSCs定向分化?从而为BMSCs在体内分化提供一定的理论依据,为BMSCs作为牙周组织工程种子细胞的体外诱导分化条件提供一条新的思路。【内容及方法】采用全骨髓贴壁法培养大鼠BMSCs,通过观察细胞形态及生长特性、生长曲线、成骨及成脂肪诱导对其进行鉴定;酶消化法结合组织块法培养大鼠PDLFs ,通过波形丝蛋白、角蛋白免疫细胞化学染色及矿化诱导进行鉴定。建立间接共培养模型,设间接共培养BMSCs组(将BMSCs与PDLFs按1:1比例进行体外非接触式共培养),并设单独培养BMSCs组与单独培养PDLFs组为对照组。分别于共培养后的第3、5天,检测以上3组细胞的碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性。于共培养第14天,终止培养。用半定量RT-PCR方法检测3组细胞的骨钙素(Osteocalcin ,OCN)、骨涎蛋白(Bone sialoprotein ,BSP)、Ⅲ型胶原(Collagen typeⅢ,COLⅢ)、Runx2的mRNA表达水平。【结果】间接共培养后BMSCs被诱导为牙周膜成纤维样细胞,表现出一些类似PDLFs的性质,包括ALP活性的降低,OCN、COLⅢ、Runx2 mRNA表达水平的升高以及BSP mRNA表达水平的降低。间接共培养组BMSCs的各检测指标与单独培养PDLFs组无统计学差别,与单独培养BMSCs组有统计学差别。【结论】通过体外非接触式共培养也可以诱导BMSCs向PDLFs分化。细胞间直接接触反应并非诱导BMSCs向PDLFs分化的必要条件,PDLFs的旁分泌调节信号也可单独对诱导BMSCs分化起作用。