褪黑素对白血病干细胞样细胞KG-1a增殖、细胞周期及凋亡影响的研究

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目的:本实验以KG1a细胞系为白血病干细胞模型,研究褪黑素对KG1a细胞活性、增殖、细胞周期分布及凋亡的影响,并初步探讨其可能的抗白血病干细胞的作用机制,为临床急性髓系白血病的治疗提供新的候选药物以及治疗思路。方法:采用CCK-8法检测褪黑素对KG1a细胞活力的影响,并计算褪黑素对KG1a细胞的半数抑制浓度;采用Edu法检测褪黑素对KG1a细胞增殖的影响;采用集落形成实验检测褪黑素对KG1a细胞自我更新能力的影响;采用PI单染法和Annexin V-FITC/PI分别双染法检测褪黑素对KG1a细胞细胞周期分布以及凋亡的影响;采用TUNEL染色进一步检测褪黑素对KG1a细胞凋亡的影响;采用Western blot检测褪黑素对KG1a细胞Bcl-2,Bax,cleaved PARP等凋亡相关蛋白的表达情况的影响。结果:CCK-8实验显示褪黑素呈时间和剂量依耐性抑制KG1a细胞的活性,褪黑素作用24h和48h IC50分别为(1.28±0.65)m M和(0.26±0.73)m M;Edu实验显示褪黑素可以抑制KG1a细胞的增殖;集落形成实验显示褪黑素可以抑制KG1a细胞的自我更新;流式细胞术检测显示褪黑素可以将KG1a细胞阻滞在G1/S期,同时可以显著诱导KG1a凋亡;TUNEL染色进一步证明了褪黑素可以诱导KG1a细胞的凋亡;Western blot检测显示褪黑素可以诱导KG1a细胞PARP的活化,增加促凋亡蛋白Bax的表达量,减少抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量。结论:褪黑素显示出抗白血病干细胞的多重效应,包括抑制KG1a细胞的活性与增殖,抑制其集落形成能力,阻滞其细胞周期并诱导其凋亡。褪黑素诱导KG1a细胞凋亡与PARP的活化,上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达有关,其具体的抗白血病机制有待进一步研究。
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