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目的:探讨何首乌饮延缓大鼠睾丸Leydig细胞衰老的胰岛素通路调控机制。方法:1.运用自由基氧化损伤方法建立睾丸Leydig细胞衰老模型,β-半乳糖苷酶染色法检测各组Leydig细胞中β-半乳糖苷酶的活性,碘化丙啶染色法测定各组Leydig细胞的细胞周期分布,判定睾丸Leydig细胞衰老模型是否成功建立。2.运用免疫荧光观察睾丸Leydig细胞胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因IGF-1、INSR、IRS1、IRS2、IGFBP3蛋白表达位置。3.Western blot技术检测睾丸Leydig细胞胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因IGF-1、INSR、IRS1、IRS2、IGFBP3的蛋白表达水平。4.RT-q PCR技术检测睾丸Leydig细胞胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因IGF-1、INSR、IRS1、IRS2、IGFBP3的m RNA表达水平。5.使用胰岛素受体/IGF-1受体特异性抑制剂BMS-754807处理衰老睾丸Leydig细胞,运用RT-q PCR技术检测胰岛素/IGF-1信号通路下游基因Bcl-2的表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平。结果:1.β-半乳糖苷酶阳性细胞质呈蓝色,衰老组β-半乳糖苷酶活性高于正常组(P<0.05),衰老组睾丸Leydig细胞β-半乳糖苷酶阳性细胞率可达60%以上;衰老组G1期细胞百分比高于正常组(P<0.05),S期、G2期细胞百分比低于正常组(P<0.05),细胞阻滞在G1期,表明Leydig细胞衰老模型建立成功。2.免疫荧光和Western blot结果显示:阳性产物发红色荧光。衰老组IGF-1,INSR,IRS1,IRS2平均光密度明显低于正常组(P<0.05),未检测到IGFBP3的表达。何首乌饮干预后Leydig细胞中IGF-1,INSR,IRS1,IRS2平均光密度明显高于衰老组(P<0.05)。经Western Blot技术半定量分析发现,各组IGF-1,INSR,IRS1,IRS2蛋白表达水平与荧光免疫染色结果一致(P<0.05),也未检测到IGFBP3的蛋白表达。3.RT-q PCR结果显示:衰老组IGF-1,INSR,IRS1,IRS2 m RNA表达水平明显低于正常组(P<0.05),IGFBP3的m RNA表达明显高于正常组(P<0.05);何首乌饮干预组IGF-1,INSR,IRS1,IRS2 m RNA表达水平明显高于细胞衰老模型组(P<0.05),IGFBP3的m RNA表达明显低于细胞衰老模型组(P<0.05)。4.运用胰岛素受体/IGF受体特异性抑制剂BMS-754807处理睾丸Leydig细胞后,胰岛素/IGF-1信号通路下游基因Bcl-2 m RNA表达明显低于衰老组(P<0.05)。流式细胞术测结果显示,给予何首乌饮干预可使衰老Leydig细胞的凋亡明显下调(P<0.05),用抑制剂BMS-7548079和何首乌饮同时处理衰老Leydig细胞后,细胞凋亡率增加(P<0.05)。结论:1.何首乌饮可提高IGF-1,INSR,IRS1,IRS2 m RNA和蛋白表达。2.何首乌饮可降低IGFBP3的m RNA延缓大鼠睾丸Leydig细胞衰老。3.何首乌饮通过胰岛素/IGF-1信号传导通路调控大鼠睾丸Leydig细胞下游基因Bcl-2mRNA。