野生食肉类动物,如野狼、野狗、赤狐、浣熊等是狂犬病病毒的自然携带者或传播者。防止野生食肉类动物的狂犬病在人和家养动物之间的扩散是防制狂犬病的重要环节。与家养动物注射用疫苗不同,野生食肉类动物口服疫苗由抗原、佐剂、诱饵三个部分组成。本研究的目的是(1)用细菌脂多糖、氢氧化锌、枸杞多糖、甘露低聚糖筛选适合口服疫苗用的免疫佐剂,并验证其增强免疫反应的效果;(2)用牛肉粉、鸡肉粉、鱼肉粉、奶粉、血粉为主料制备口服疫苗用诱饵,并检测诱饵的采食性以及包埋效应。研究方法:采用同步接毒法在BHK-21细胞上增殖狂犬病病毒SRV9弱毒疫苗株,通过半数荧光灶形成量(FFD50)试验对培养病毒滴度进行检测。通过正交试验方法对细菌脂多糖、氢氧化锌、枸杞多糖、甘露低聚糖进行配方筛选,用昆明小鼠做佐剂的免疫效力实验。筛选出的最佳复合佐剂与狂犬病病毒SRV9弱毒疫苗混匀后灌喂实验组小鼠,人用狂犬病疫苗腹腔3次注射、单一病毒2次口服以及单一病毒3次口服的小鼠分别作为对照组。于免疫后14天(DAI 14)、DAI 21、DAI 28以及DAI 35分别采集实验组和对照组小鼠血液,检测血清IgG。用荧光抗体病毒中和试验(FAVN)对DAI 35的实验组小鼠血清抗体进行中和试验。用正交试验的方法优选诱饵配方,用理化方法检测其采食性和包埋效应。研究结果:(1)增殖、获得的狂犬病SRV9弱毒滴度(FFD50)为10-5.42/0.1 mL;(2)优选的复合佐剂组方是细菌脂多糖100μg、氢氧化锌0.8 mg、枸杞多糖50 mg以及甘露低聚糖10mg。在DAI 28,实验组小鼠的血清IgG和肠道SIgA水平均值分别为3239μg/m L和1.56 ng/mL;(3)在DAI 35,复合佐剂+狂犬病病毒组诱导的体液免疫效果优于单一病毒2次口服实验组和单一病毒3次口服实验组,血清抗体平均效价为0.63 IU/mL,已达到保护水平;(4)制备出五种诱饵组方,即鱼肉味、血粉味、牛肉味、鸡肉味、奶粉味诱饵组方;(5)在诱饵的采食试验中,猫、犬、狼、狐狸对鱼肉味诱饵的采食率最高,其次是血粉味和奶味诱饵;(6)诱饵在-80℃、-20℃可长期保存,在4℃、7 d条件下保存完好,即诱饵质地适中,不变形、无着染包埋疫苗渗漏。在37℃、12 h条件下,鱼肉味和血粉味诱饵保持相对稳定,即质地适中、无包埋物渗漏,而牛肉粉、鸡肉粉、奶粉型诱饵出现变形、渗漏。小结:本文筛选出野生食肉类动物口服疫苗所必需的复合免疫佐剂。免疫佐剂+狂犬病病毒可增加狂犬病病毒的免疫效应。本文制备了牛肉味、鸡肉味、鱼肉味、血粉味和奶油味五种口服疫苗用诱饵,并确定了诱饵的采食性及包埋效应。本文所研究的复合免疫佐剂和诱饵为进一步研发重组减毒狂犬病口服疫苗提供了必要的技术支撑。