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本研究将含有编码猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因的重组杆状病毒接种于SF9昆虫细胞中,经复壮和悬浮培养后收集细胞上清,过滤后用镍柱做亲和层析纯化E2蛋白,经SDS-PAGE鉴定,在约53Kda处有一特异表达的蛋白带,同猪瘟病毒E2蛋白的大小基本一致；Western-blot印迹表明,该蛋白带能与猪瘟阳性血清发生特异反应。将猪瘟单克隆抗体WH303株的杂交瘤细胞从液氮中取出复苏,培养增殖后接种于BALB/C小鼠腹腔,5天后收获含有单抗的腹水,并测定其效价。腹水处理后用ProteinG亲和层析纯化单克隆抗体,经SDS-PAGE鉴定后用过碘酸钠法进行标记,测定酶标抗体的浓度,并于-20°C冻存。以纯化的E2蛋白和制备的酶标单抗为基础,建立了猪瘟抗体阻断ELISA检测方法。通过对ELISA各反应条件的优化,确定了最佳反应条件：E2蛋白的最佳包被浓度为0.09μg/ml,最适包被条件为4℃16h；最佳封闭液为PBST+10%脱脂奶粉+Proclin300+5%海藻糖,封闭条件为4°C 16h；最佳血清稀释液为PBST+5%奶粉,稀释倍数为2倍,血清孵育时间为37℃1h；酶标单抗的最佳工作浓度为0.37μg/ml,最佳酶标单抗稀释液为Peroxidase Conjugate Stabilizer,工作条件为25℃30min。采用优化好的ELISA反应条件,检测了猪瘟抗体血清盘,将OD值用ROC曲线法进行分析,得到本方法的阴阳血清判定值为：36%的抗体阻断率,检测灰区介于32%-40%的抗体阻断率之间。对建立的猪瘟抗体阻断ELISA法进行了性能评估,结果表明：本方法和常见的猪病毒抗体没有交叉反应；与IDEXX试剂盒相比较,其特异性和敏感性分别为：94.2%和98%；用本方法检测“欧盟实验室质控品”,结果同IDEXX猪瘟抗体试剂盒的检测结果一致；用免疫猪的血清评估本方法,显示本方法和IDEXX试剂盒的相关性高于0.8。根据本方法的检测结果,对猪瘟弱毒疫苗的免疫剂量和免疫保护期进行了研究。用1200RID、6000 RID和24000 RID三种不同剂量的猪瘟弱毒活疫苗免疫30日龄断奶仔猪,检测其抗体水平的变化,并用猪瘟强毒感染试验猪,观察抗体对猪的保护。结果表明：不同组试验猪的抗体水平没有显著差异,接种疫苗后的前3个月,免疫猪的抗体水平迅速升高,70后天抗体水平趋于稳定,12个月后的猪瘟抗体仍保持在很高的水平,且能完全抵御猪瘟石门强毒的攻击。