拮抗细菌对姜瘟病的生物防治研究

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本研究在四川地区的生态条件下,以防治姜瘟病为目的,从姜栽培区未发病及发病较轻的姜块茎围土壤中分离并筛选出大量对姜瘟病原菌有拮抗作用的细菌菌株。通过平板扩散法培养检测,筛选出对姜瘟病菌具有强拮抗作用的菌株,同时研究菌株的分类地位、发酵条件、土壤中的定殖情况、促生性以及田间防效试验,为姜瘟病的生物防治提供依据,主要研究结果如下: 2003年6月在雅安飞仙关多功乡13个未发病或发病较轻的生姜田块中分离到217个细菌菌株,通过平板抑菌试验初筛,其中对姜瘟菌有抑制作用的菌株有32株,占菌株总分离数的14.7%,抑菌圈直径1cm以上的有19个,占拮抗菌总数的59.4%。其中三个(L1、D4、T10)菌株对姜瘟病有强抑菌作用,抑菌圈直径都在2.2cm以上。 L1、D4、T10菌株除对姜瘟病菌有抑制作用外,也对葡萄孢菌(Botrytis cinereaPers.),油菜菌核菌(Sclerotinia sclerotiorum)及小麦赤霉菌(Gibberella zeae)等多种病原真菌有抑制作用,可见,它们具有一定的广谱抗真菌作用。 对L1、D4、T10菌株进行形态特征和生理生化鉴定,确定L1为蜡状芽孢杆菌(Bacillusceres)、D4和T1为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。 L1、D4、T10菌株在姜块茎围的定殖试验表明:L1的最终定殖密度在非灭菌土中为1.03×104fu/g,在灭菌土中为3.88x104cfu/g,比D4和T10分别在非灭菌土和灭菌土中的最终定殖密度都高。它们对生姜的生长均有一定的促进作用,其中L1菌株的促生性最为明显。 用不同浓度的菌悬液处理田间自然发病的生姜田块,结果表明:生防菌对姜瘟病均具有防治作用,且在较高浓度下防治效果更好,L1菌株在浓度为2×10.8cfu/ml时,防效达到60.1%。 选用田间防效较好的L1菌株用比浊法和活菌数法测定它的生长曲线,测定结果基本符合细菌生长规律,且两种方法测出的细菌对数生长期的数据基本一致。 研究不同条件下L1菌株的生长情况及抑菌活性的大小,单因子试验表明:L1菌株的最佳培养基是NYBD培养基,最佳碳源是葡萄糖,最佳氮源是牛肉浸膏和酵母浸膏;在PH为7,装液量为25ml,温度为30℃的条件下可获得最佳的生长状态与最大的抑菌活性。 葡萄糖、牛肉浸膏、酵母浸膏、NaCl浓度四因素的正交试验表明:L1菌株获得最大抑菌活性的培养基配方为葡萄糖25g,牛肉浸膏10g,酵母浸膏5g,NaCl 1.2%。其影响因素作用大小依次为:酵母浸膏>葡萄糖>牛肉浸膏>NaCl。L1菌株获得最大生长量的培养基配方为葡萄糖20g,牛肉浸膏10g,酵母浸膏3g,NaCl 1.5%。其影响因素作用大小依次为:葡萄糖>酵母浸膏>NaCl>牛肉浸膏。 用(NH42SO4沉淀法提取蛋白及多肽类抑菌物质,最佳(NH42SO4饱和度为60%。DEAE纤维素离子交换层析、SephadexG-100凝胶层析等方法,对其进行分离纯
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