论文部分内容阅读
目的：(1)探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人肝癌HepG2细胞系中碱性成纤维生长因子(bFGF) mRNA表达的作用。(2)比较CCK-8法与BrdU-ELISA法检测人肝癌HepG2细胞增殖的可靠性。方法：(1)离体培养人肝癌HepG2细胞,采取不同浓度的AngⅡ对细胞进行相应药物处理后收集不同作用时间的细胞进行检测,实验分组每组设3个对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)及荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)法,分别检测AngⅡ处理前后人肝癌HepG2细胞系中bFGF的表达情况,同时采用CCK-8法检测Ang Ⅱ对人肝癌HepG2细胞增殖的影响。(2)待细胞贴壁生长融合度分别达60%及80%时,以10-7mol/L浓度AngⅡ刺激细胞增殖,24h后分别用CCK-8法和BrdU-ELISA法,以及免疫荧光染色方法检测细胞增殖情况。结果：(1)AngⅡ不仅能够刺激人肝癌HepG2细胞增殖,同时还能上调HepG2细胞中bFGF mRNA的表达(P<0.01),且药物作用随着作用时间及作用浓度的增加而增强,在当AngⅡ浓度为10-7mol/L,作用时间为48h时,这种促表达作用达到最高峰,且该作用可以被AngⅡ1型受体(AT1R)拮抗剂所拮抗。(2)细胞贴壁生长融合度达60%时CCK-8检测组和BrdU-ELISA检测组与各自的对照组比较,比值分别为1.30和1.59,检测值近似；细胞贴壁生长融合度达80%时二者分别为1.02和1.40,免疫荧光结果显示Ang Ⅱ刺激组的增殖细胞明显高于对照组。结论：(1)AngⅡ通过诱导人肝癌HepG2细胞中bFGFmRNA的表达,上调肝癌HepG2细胞中bFGF的含量,从而一定程度上促进了肝癌的生长及转移。(2)与CCK-8法相比,BrdU-ELISA更能客观地反映细胞增殖情况。