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研究目的: 1.研究蓝莓花青素对胃癌MGC-803细胞的增殖及凋亡作用,并探究其抗癌机制,为临床癌症的治疗及防治提供理论基础和科学依据; 2.探究蓝莓花青素对裸鼠异位移植瘤的生长抑制作用及其机制。 研究方法: 1.①体外培养胃癌MGC-803细胞,分别加入不同浓度的蓝莓花青素处理,利用CCK法、流式细胞术(FCM)、Hoechst染色检测不同浓度的蓝莓花青素对MGC-803细胞增殖和凋亡的影响;②实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测细胞相关凋亡基因P53、CCND3、P73、SFN、CASPASE8和FAM200AmRNA的mRNA表达;③蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞CASPASE8和P73的蛋白表达水平。 2.①构建裸鼠胃癌模型,在裸鼠腋窝中下部皮下注射MGC-803细胞悬液,10天左右待瘤体达到5×5mm3,随机分三组(阴性对照组,实验对照组,阳性对照组),分别腹腔注射生理盐水(normal saline,NS)、蓝莓花青素(anthocyanin)、紫衫醇(paclitaxel,PTX),每隔两天注射一次,剂量为10mg.kg-1,干预8周;②期间观察瘤体和重量变化,绘制瘤体生长曲线以及裸鼠重量变化曲线;③对剥离出的瘤组织进行实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测相关凋亡基因P53、CCND3、P73、SFN、CASPASE8和FAM200A mRNA的表达;④免疫组织化学(Immunohistochemistry)检测蛋白CASPASE8和P73的表达。 研究结果: 1.①蓝莓花青素呈时间和剂量依赖性抑制胃癌MGC-803细胞的增殖(P<0.05),呈现剂量依赖性诱导癌细胞凋亡,相对空白组,早晚期细胞凋亡率分别随蓝莓花青素浓度的增加而升高,并且早期凋亡剂量组组间差异显著(P<0.05);②相对空白对照组,P53、P73和SFNmRNA表达水平上调(P<0.05),并且剂量组组间差异显著(P<0.05);CASPASE8和FAM200A表达水平下调(P<0.05),但剂量组组间差异不显著(P>0.05);CCND3mRNA表达水平变化不显著(P>0.05)③相对空白对照组,CASPASE8和P73蛋白表达水平分别下调和上调(P<0.05)。 2.①裸鼠称重结果显示,相对阴对照组,蓝莓花青素处理组裸鼠体重变化差异不显著(P>0.05);②瘤体测量结果显示,相对阴性对照组,蓝莓花青素处理组明显抑制了瘤体的生长(P<0.05),并且组间差异显著(P<0.05);③相对空白对照组CCND3mRNA表达水平显著上调(P<0.05),CASPASE8、P53、FAM200AmRNA表达水平显著下调(P<0.05),P73和SFN表达水平变化不显著(P>0.05);④相对阴性对照组,CASPASE8蛋白表达减弱,P73蛋白表达增强。 研究结论: 1.体外实验结论 1)蓝莓花青素对胃癌MGC-803细胞具有增殖抑制以及诱导凋亡的作用,并呈现时间和剂量依赖性; 2)蓝莓花青素对MGC-803细胞的抗癌机制与P53、P73、SFN mRNA表达水平均上调(P<0.05)和CASPASE8、FAM200A mRNA表达水平下调(P<0.05)相关,并呈现剂量依赖性。 3)蓝莓花青素对诱导MGC-803细胞凋亡与蛋白P73表达上调和CASPASE8表达下调相关。 2.体内实验结论 1)胃癌MGC-803细胞移植成瘤率为100%。 2)蓝莓花青素抗肿瘤作用性质稳定,安全性高,无毒副作用,并且作用优良。 3)蓝莓花青素能够抑制人胃癌MGC-803细胞裸鼠异位移植瘤的生长。 4)蓝莓花青素通过内源性凋亡通路抑制人胃癌MGC-803细胞裸鼠异位移植瘤的生长。