【摘 要】
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单增李斯特菌是一种常见的食源性致病微生物,这种细菌含有各种类型的毒力因子会攻击人体系统,严重威胁着人类健康。目前检测单增李斯特菌的常见检测方法存在着时间长,需要精
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单增李斯特菌是一种常见的食源性致病微生物,这种细菌含有各种类型的毒力因子会攻击人体系统,严重威胁着人类健康。目前检测单增李斯特菌的常见检测方法存在着时间长,需要精密高级的仪器等各种弊端,随着分子生物学领域的发展,等温扩增方法由于反应温度恒定,对仪器的依赖度比较低,因此非常适合现场快速即时检测。但是,对所有的核酸检测方法来说,核酸的提取仍然需要耗费很多时间,成为了限制核酸检测方法发展的主要因素。在本文中首次采用壳聚糖修饰的硅胶膜进行核酸的吸附与富集,全程无有机试剂参与,系统优化之后确定出当使用1%的分子量<2 kD的壳聚糖溶液进行修饰,在pH=5的MES缓冲环境中进行结合,在pH=9的Tris缓冲环境中进行洗脱可以将核酸的吸附效率大幅度提高。然后在此基础上,建立了一种快速提取与检测的纸基芯片,用于单增李斯特菌的核酸―提取—扩增—判读‖一体化检测。通过壳聚糖修饰的硅胶膜进行快速核酸提取,然后原位进行SEA等温反应进行信号放大,在便携式紫外灯下完成样品的肉眼可视化检测,检测限可达10~2 CFU/m L,与目前一体化检测的研究相比,检测时间和检测限都能够达到前列水平,样品从核酸的快速提取到等温扩增检测将完全在芯片上进行,无需大型的精密仪器,全程可以控制在1 h之内,作为一种单增李斯特菌现场初筛快速提取与检测的新方法具有很大的应用潜力。
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