【摘 要】
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目的本研究采用不同浓度的低分子肝素作用于胚泡植入障碍模型小鼠的子宫内膜,通过检测肝素结合性表皮生长因子(heparin binding epidermal growth factor,HBEGF)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(Serin
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目的本研究采用不同浓度的低分子肝素作用于胚泡植入障碍模型小鼠的子宫内膜,通过检测肝素结合性表皮生长因子(heparin binding epidermal growth factor,HBEGF)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(Serine/threonine protein kinase,PKB也称Akt)在子宫内膜组织中的表达,探究低分子肝素能否通过EGFR/PI3K/Akt信号通路改善子宫内膜容受性。方法将72只C57BL/6小鼠随机分为6组,空白组、模型组、阿司匹林组、低分子肝素高剂量组、低分子肝素中剂量组、低分子肝素低剂量组,每组12只。除空白组外,其余各组用吲哚美辛建立胚泡植入障碍模型。妊娠第5天脱颈处死小鼠,观察小鼠子宫形态,计数小鼠子宫胚泡植入数,HE染色观察小鼠子宫内膜形态,应用免疫组化、Western Blot、Real-time PCR方法检测子宫内膜HBEGF、p EGFR、p PI3K、p Akt的表达。结果1、小鼠子宫形态:与模型组相比,其余各组小鼠子宫胚泡着床处呈串珠样,分布均匀,染色清晰。2、胚泡植入位点数:与模型组(5.20±0.95)相比较,低分子肝素高剂量组(9.50±1.35)平均胚泡植入位点数增加最为著性(P<0.05);与空白组(9.00±1.05)相比,各治疗组均无显著性差异(P>0.05)。3、子宫内膜HE染色:模型组子宫内膜变薄,间质细胞较小且排列疏松,少见腺体及血管;低分子肝素组间质细胞较大且排列紧密,腺体及血管数多,与模型组比较有明显改善,高、中剂量组改变最明显,接近或达到空白组水平。4、HBEGF表达:(1)蛋白定位:模型组在子宫腔上皮和腺上皮呈阴性,间质细胞呈弱阳性表达,空白组及药物组在子宫腔上皮、腺上皮及间质细胞呈阳性表达;(2)蛋白表达:与模型组(0.08±0.02)比较,低分子肝素高剂量组(1.02±0.11)显著增高(P<0.01);(3)m RNA表达:与模型组(0.58±0.38)比较,低分子肝素高剂量组(1.32±0.40)子宫内膜HBEGF m RNA表达含量增高(P<0.05),且与空白组(0.91±0.14)比较无显著性差异(P>0.05)。5、EGFR/PI3K/Akt信号通路:(1)蛋白定位:模型组p EGFR、p PI3K、p AKT在子宫腔上皮、腺上皮呈弱阳性表达,在血管上皮细胞呈弱阳性或阴性表达,空白组及药物组在子宫腔上皮、腺上皮呈阳性表达;(2)蛋白表达:与模型组比较,其余各组p EGFR、p PI3K、p Akt蛋白表达均增高(P<0.05),其中低分子肝素高剂量组p EGFR蛋白表达(1.46±0.26)、p PI3K蛋白表达(1.01±0.12)、p Akt蛋白表达(1.21±0.11)增高尤为显著(P<0.01),与空白组比较,低分子肝素高剂量组p EGFR、p Akt蛋白表达增高(P<0.05);(3)m RNA表达:与模型组比较,低分子肝素高剂量组子宫内膜EGFR(1.22±0.61)、PI3K(1.68±1.14)、Akt(1.91±0.85)m RNA表达含量均增高(P<0.05)。结论低分子肝素可通过促进HBEGF的表达,激活EGFR/PI3K/Akt信号通路,使胚泡植入障碍小鼠子宫内膜上皮细胞、间质细胞的数量增多,腺体、血管的生成增加,进而改善子宫内膜容受性,增加胚泡植入成功率。
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