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葡萄卷叶病(GLD)是葡萄上危害最重要的病毒病害之一,在全世界各葡萄产区均有发生。引起该病害的病原复杂,目前已鉴定的葡萄卷叶相关病毒(GLRaVs)有11种(GLRaV 1～11)。分类上为长线病毒科(Closteroviridae),其中GLRaV-1,-3,-4,-5,-6,-8和-9属于葡萄卷叶病毒属(Ampelovirus),GLRaV-2属于长线病毒属(Closterovirus),GLRaV-7尚未归属。仅发现GLRaV-1、GLRaV-2和GLRaV-3可通过自然介体传播。本研究采用ELISA技术对2008年从郑州果树所葡萄种质资源圃采集的表现卷叶症状的28份葡萄品种的5种GLRaVs进行检测,其中GLRaV-1发生最普遍,其检出率分别达35.7%;其次为GLRaV-3,检出率为25%;GLRaV-6和GLRaV-7的检出率分别为14.3%和17.9%;GLRaV-2检出率相对较低,为7.1%,且多种GLRaVs复合感染的现象普遍。以85份带有卷叶症状的样品为材料,刮取韧皮部组织提取病毒dsRNA,以dsRNA为模板,采用根据GLRaVs的HSP70基因保守序列设计引物LR7HSP70L/LR7HSP70R进行RT-PCR扩增,从14份葡萄样品中获得了预期大小约590bp的目标片段,经克隆和测序,将得到的核苷酸序列在GenBank数据库中进行Blast分析及核苷酸同源性比较,结果表明所获扩增产物分别为GLRaV-1、GLRaV-3和GLRaV-7三种病毒的HSP70基因片段。其中GLRaV-1和GLRaV-3扩增片段大小为602bp;GLRaV-7扩增片段大小为590bp。通过对随机挑选克隆进行PCR-SSCP分析,发现来自样品‘白雅’的16个克隆产生4种SSCP带型;来自样品‘阿芳’的10个克隆产生2种SSCP带型。选取表现不同带型的克隆进行测序,结果显示来自‘白雅’的扩增产物为GLRaV-1,GLRaV-3和GLRaV-7的HSP70混合物;来自样品‘阿芳’的扩增产物为GLRaV-3和GLRaV-7两种病毒的HSP70混合。对所测定序列进行比对分析,GLRaV-1的HSP70基因编码区核苷酸序列和推导的氨基酸序列相似性分别为82.6-91.0%和85.0-96.0%,GLRaV-3为82.6-91.0%和85.0-96.0%,GLRaV-7为94.1-100%和91.8-100%。