Apelin-13对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡影响的研究

来源 :南华大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:he110521
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目的:研究Apelin-13对肝癌HepG2细胞的细胞增殖情况及增殖相关蛋白CyclinD1表达和细胞凋亡情况及凋亡相关蛋白Caspase3的表达水平的影响,为临床肝癌治疗药物的研发提供新的思路。方法:培养HepG2细胞,将同一批处于对数生长期的HepG2细胞等量计数后,按实验分组:Apelin-13量效关系组(①10%FBS(对照组);②0.0001μmol/L;③0.001μmol/L;④0.01μmol/L;⑤0.1μmol/L,处理时间为24h);Apelin-13时效关系组(①0h(对照组);②6h;③12h;④18h;⑤24h,处理浓度为0.1μmol/L)。通过MTT法检测处理后各组细胞的数量,比较不同Apelin-13浓度及处理时间下HepG2细胞的增殖情况。提取按时效及量效关系进行Apelin-13处理的HepG2细胞的蛋白,通过Western Blot检测并比较不同Apelin-13浓度及处理时间的HepG2细胞细胞增殖相关蛋白CyclinD1和细胞凋亡相关蛋白Caspase3的表达水平。结果:1.量效关系组:①10%FBS (对照组);②0.0001μmol/L;③0.001μmol/L;④0.01μmol/L;⑤0.1μmol/L, MTT检测各组细胞密度, OD值分别为:①0.464±0.025;②0.510±0.094;③0.547±0.174;④0.598±0.035;⑤0.654±0.016。Apelin-13呈浓度依赖促进HepG2细胞增殖,随Apelin-13浓度提高,细胞增殖增强,各组组间两两比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。2.时效关系组:①0h(对照组);②6h;③12h;④18h;⑤24h;MTT检测各组细胞密度,OD值分别为:①0.489±0.030;②0.537±0.042;③0.587±0.042;④0.632±0.022;⑤0.681±0.016。Apelin-13呈时间依赖性促进HepG2细胞增殖,在24h内呈递增趋势,Apelin-13处理时间越长,细胞密度越高,各组组间两两比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。3. Western blot法检测结果显示,Apelin-13按照量效及时效分别处理HepG2细胞后,量效关系组各组的CyclinD1蛋白的灰度值比值分别为(①0.544±0.026;②0.699±0.015;③0.831±0.012;④0.985±0.109;⑤1.160±0.098),时效关系组各组的CyclinD1蛋白的灰度值比值分别为(①0.582±0.020;②0.730±0.021;③0.891±0.020;④1.059±0.064;⑤1.290±0.041)CyclinD1随Apelin-13处理浓度的升高而升高,随处理时间延长而升高。各实验组与对照组比较具有显著性差异(P<0.01),各实验组组间两两比较具有显著性差异(P<0.05)。4. Western blot法检测结果显示,Apelin-13按照量效及时效处理HepG2细胞后,量效关系组各组的Caspase3蛋白的灰度值比值分别为(①1.024±0.092;②0.826±0.042;③0.683±0.063;④0.524±0.052;⑤0.259±0.010),时效关系组各组的Caspase3蛋白的灰度值比值分别为(①0.855±0.056;②0.694±0.046;③0.446±0.020;④0.269±0.017;⑤0.189±0.009)Caspase3随Apelin-13处理浓度的升高而降低,随处理时间延长而降低。各实验组与对照组比较具有显著性差异(P<0.01),各实验组组间两两比较具有显著性差异(P<0.05)。结论:1、Apelin-13能浓度依赖及时间依赖促进肝细胞癌HepG2细胞CyclinD1的表达,从而促进HepG2细胞的增殖。2、Apelin-13能浓度依赖及时间依赖抑制肝细胞癌HepG2细胞Caspase3的表达,从而抑制HepG2细胞的凋亡。
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