【摘 要】
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该文以优良苹果酒酵母AW(经鉴定为乏酸缺陷)和具有核融合缺陷的嗜杀酵母5045为亲株,采用原生质体融合技术选育嗜杀苹果酒酵母.以亲朱AW原生质体制备的条件,如预处理、菌体培
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该文以优良苹果酒酵母AW(经鉴定为乏酸缺陷)和具有核融合缺陷的嗜杀酵母5045为亲株,采用原生质体融合技术选育嗜杀苹果酒酵母.以亲朱AW原生质体制备的条件,如预处理、菌体培养时间、酶浓度及酶解时间以及再生培养方法等进行了研究,得到AW原生质体的最佳制备条件:取对数生长早期(培养8h)的细胞酶解前采用0.05MEDTA和0.5Mβ-巯基乙醇溶液(体积比为25:1)在30℃处理20min;采胳膊0.05mg/ml酶浓,酶解40~60min,原生质体形成率为99.7﹪—99.99﹪,双层倾注法再生率为0.253﹪~0.161﹪.应用35﹪的PEG(分子量为6000)作为促融剂,在30~大量处理燕果酒酵母AW和5045单倍体的原生质体混合液20min,促使两种原生质体融合.获得的融合子经遗传稳定性实验、初筛和复筛、小型酿造实验,最终筛选出一株发酵性能良好的嗜杀苹果酒酵母F3.通过对F3的细胞形态、细胞大小、生孢子实验、营养要求的测定、dsRNA质粒的提取和琼脂糖凝胶电泳以及发酵过程中对野生酵母生长的抑制作用,F3分泌的嗜杀毒素活性的分析和测定结果表明:F3是一株既含有供体菌嗜杀质粒又含有受体菌良好核基因的异质体.
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