高白鲑性腺发育的组织学研究及GnRH的分布与克隆

来源 :石河子大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:mengpiaoyao
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高白鲑作为一种重要经济鱼类,已于1998年引入新疆赛里木湖。该鱼生长迅速、肉味鲜美、适应性强,主要以浮游动物为食,体长可达到55cm,体重达3kg,已经成为带动新疆冷水鱼繁殖领域不可或缺的一部分。但是,高白鲑生殖器官成熟转化非常快,群体繁殖期非常短,这就造成采卵时时间上不易把握,最后导致鱼苗的低产。另外,在赛里木湖的自然气候条件下,高白鲑的繁殖率非常低,且大部分选自自繁后代,如此经过多年的生殖隔离和多代近交,引起了养殖性状不同程度的退化。目前赛里木湖种苗供应不足,使很多地方引种后建立的独立繁殖小群体也受到影响,由于鱼苗的投放量不够,而导致高白鲑市场的供应量严重不足。目前,高白鲑的人工繁殖仍然处于摸索阶段,而如何促进性腺发育成熟就成了生产上亟待解决的问题。所以,开展对高白鲑的生殖生物学的研究非常迫切。GnRH作为控制垂体促黄体激素(LH)和卵泡刺激素(FSH)释放的重要因素,在鱼类生殖过程中起着重要的作用。在脊椎动物生长发育、生殖行为、妊娠、分娩繁殖等过程中,主要参与调节类固醇的生成、细胞增殖、受精、粘连细胞外基质和细胞迁移等生理活动。由于GnRH在鱼类生产中具有重要的潜在应用价值,所以鱼类GnRH及其受体的研究已成为生殖内分泌研究的热点之一。为了进一步了解GnRH在该鱼的繁殖过程中所扮演的角色,掌握该鱼的繁殖规律和催产的最佳时间,提高催产效果,克服目前人工繁殖困难的状况。本研究分别应用免疫组织化学和实时荧光定量的方法检测了cGnRH-Ⅱ在性成熟髙白鲑神经系统和性腺中的分布定位情况,以及该基因在高白鲑各个组织中的分布情况,研究结果将为高白鲑性腺的组织学研究提供基础资料。主要研究结果如下:1.髙白鲑性腺的组织学研究通过光学显微镜对新疆赛里木湖高白鲑性腺的组织学结构进行了研究。结果表明,高白鲑的精巢为小叶型,其精原细胞存在于精小叶内壁上,精母细胞和未成熟的精子细胞位于精小囊中,精子成熟后精小囊破裂释放精子进入小叶腔,完成发育过程,精小叶间存在大量的间质细胞、毛细血管和成纤维细胞。高白鲑卵巢是发育到第Ⅳ时期的卵巢,卵巢内存在不同发育时相的卵母细胞。2.GnRH在性成熟高白鲑神经系统及性腺中的分布定位应用免疫组织化学的方法,系统的观察了性成熟期高白鲑(Coregonuspeled)神经系统及性腺中的促性腺激素释放激素(GnRH)的分布情况。结果表明,GnRH在大脑、小脑、中脑、脊髓、延髓中免疫阳性反应明显,且主要分布在神经元。GnRH免疫阳性细胞在卵巢和精巢中均有分布,而且其阳性部位在卵巢主要分布于小生长期卵母细胞;在精巢中主要分布于间质细胞和精原细胞中。本文讨论了GnRH直接或间接参与高白鲑性腺发育成熟调节的可能性。研究结果将为下丘脑-垂体-性腺轴、神经-内分泌、GnRH功能的多样性等研究领域提供新的形态学依据。3.GnRH在性成熟髙白鲑中的克隆与表达本实验在对性成熟高白鲑(Coregonus peled)促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormones,GnRH)基因克隆和测序的基础上,设计实时定量PCR引物,以β-actin为内参基因,采用△△Ct相对定量PCR方法检测cGnRH-II基因mRNA在不同器官组织中的表达。以建立检测性成熟高白鲑cGnRH-II基因mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法,分析cGnRH-II在不同器官组织中的转录水平。结果表明cGnRH-II基因在各个组织中均有不同程度的表达;特别是在鱼脑、心脏和卵巢中有较高的表达,分别为肌肉组织中的317.86倍、122.79倍和71.01倍。研究结果将为了解GnRH直接或间接参与高白鲑性腺发育成熟调节的研究提供基础材料。
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