【摘 要】
：
目的：构建PML-RARα与hGM-CSF／hIL-2基因的真核双表达载体，检测该双表达载体在真核细胞中的蛋白表达情况，为治疗急性早幼粒细胞白血病（Acute Promyelocytic Leukemia，APL）的DNA疫苗
论文部分内容阅读
目的：构建PML-RARα与hGM-CSF／hIL-2基因的真核双表达载体，检测该双表达载体在真核细胞中的蛋白表达情况，为治疗急性早幼粒细胞白血病（Acute Promyelocytic Leukemia，APL）的DNA疫苗研究奠定基础。方法：利用RT-PCR技术从NB4细胞中扩增出PML-RARα基因片段，并将其克隆到pIRES真核双表达载体的多克隆位点A（MCS A）中，构建pIRES-PML-RARα质粒。利用PCR技术和RT-PCR技术获取hGM-CSF和hIL-2基因，并将它们分别克隆到pIRES-PML-RARα质粒的多克隆位点B（MCS B）中构建pIRES-PML-RARα-hGM-CSF和pIRES-PML-RARα-hIL-2真核双表达质粒。将测序正确的重组质粒利用LipofectamineTM 2000转染K562细胞或A549细胞，通过RT-PCR和Realtime-PCR检测重组质粒在真核细胞中的转录情况，利用点杂交、ELISA和SDS-PAGE检测蛋白表达情况。结果：成功构建了pIRES-PML-RARα、pIRES-PML-RARα-hGM-CSF和pIRES-PML-RARα-hIL-2质粒，并且测序正确。RT-PCR和Realtime-PCR鉴定表明转染K562细胞和A549细胞后这些质粒能够在真核细胞中进行转录。点杂交和ELISA结果显示重组质粒在真核细胞中可表达hGM-CSF或hIL-2蛋白，SDS-PAGE结果在预期位置亦可见到PML-RARα蛋白条带。结论：本研究将PML-RARα与hGM-CSF／hIL-2组合，成功构建了pIRES-PML-RARα以及pIRES-PML-RARα-hGM-CSF／pIRES-PML-RARα-hIL-2质粒，这些重组质粒能够在真核细胞中正常转录并表达PML-RARα和hGM-CSF／hIL-2蛋白。
其他文献
研究背景肿瘤热疗近年来颇受人们的关注,它包括温热疗法和高温原位灭活疗法两种。前者是加热肿瘤至42.5℃～45℃并保持一定的时间(数分钟至几十分钟)抑制肿瘤组织的生长以达到
对学术图书馆参与出版服务的融合路径展开研究,能够为我国出版服务的实践进展提供一定的借鉴。通过对国内外学术图书馆出版服务发展现状的梳理,从外在条件和内在需求上分析我
目的:对820例腹腔镜胆囊切除术的护理体会,为腹腔镜手术后的护理提供依据。方法:术前宣教与术后观察护理,使患者积极配合,早期锻炼,合理饮食。结果:820例腹腔镜胆囊切除术本
由于EPC项目建筑工业化过程中,总承包方自由权过大,基本符合大部分的工程管理工作,所以总承包商的能力必然对施工合同经济性造成影响。倘若总承包商并不具备相应资质,难以承
21世纪的竞争,是经济和综合国力的竞争,实际是科技和教育的竟争,归根结底是人才的竞争。人才的培养依靠教育,"振兴教育的根本在于教师",有高素质、高水平的教师才能培养出高
采用热机械循环试验装置、材料万能实验机、金相显微镜和扫描电镜考察了经0,100,200和500周次热循环处理的TC4(Ti-6Al-4V)合金在室温(293K)和低温(173K、123K、78K)的拉伸性
LED控制装置要进入日本市场,必须通过PSE认证(加贴菱形标志)。介绍了LED控制装置PSE认证依据的日本标准,详细解读了日本标准与对应的IEC标准的主要技术差异和一些具体要求,并
为严肃财经纪律,制止和防范开具虚假发票公款报销行为,经福建省委、省政府批准,福建省纪委、监察厅于2003年12月31日印发了《关于对开具虚假发票公款报销行为党纪政纪处分的
内地青春偶像剧从1998年的《将爱情进行到底》启航,经过20年的发展,逐渐找到真正属于自己的青春主题、偶像力量和影像风格。本文从"青春"和"偶像"这两个审美元素出发,把青春
<正> 人人老年,一个难免的倾向是怀旧。我是土生土长的北京人。对于老北京的一切,自是无限眷恋。可倘若要我讲出顶怀念的是什么,却又不知从何说起。反正我想的不仅仅是那已拆