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目的:通过浓度梯度法建立人胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP,研究DCLK-1与胃癌SGC7901细胞多药耐药的关系。方法:1.通过浓度梯度法建立人胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP,在倒置显微镜下对比观察细胞株生物学特征,使用细胞计数法绘制细胞生长曲线,计算耐药细胞株的群体倍增时间,MTT法得到胃癌耐药株SGC7901/DDP和胃癌SGC7901的IC50值,计算耐药指数及交叉耐药性,同时运用Western blot、RT-PCR技术检测DCLK1、多药耐药相关蛋白(MRP1)及其m RNA在SGC7901、SGC7901/DDP之间的表达差异;2.运用si RNA干扰技术沉默DCLK-1基因,建立稳定转染细胞株SGC7901/DDP-DCLK1-sh RNA、SGC7901/DDP-control-sh RNA,并运用MTT法、Western blotting技术、RT-PCR检测DCLK-1沉默后耐药性及耐药相关蛋白、m RNA表达变化。结果:1.通过浓度梯度法得到人胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP,在倒置显微镜下,我们发现SGC7901/DDP形态上呈圆形或椭圆形,出现克隆聚集现象,偶可见散在的多核瘤巨细胞,生长较亲本细胞株缓慢,其对顺铂的耐药指数为26.5倍,紫杉醇和氟尿嘧啶耐药指数分别为11.9、11.3。2.Western blot、RT-PCR技术检测DCLK1、MRP1蛋白及m RNA在S GC7901、SGC7901/DDP之间的表达差异,结果发现,与人胃癌细胞SGC7901相比,DCLK1、MRP1蛋白及m RNA在人胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP中表达明显升高(P<0.05),两者表达差异有统计学意义。3.下调耐药细胞株中的DCLK-1基因表达,建立稳定转染细胞株SG C7901/DDP-DCLK1-sh RNA、SGC7901/DDP-control-sh RNA,Western blot、RT-PCR检测SGC7901/DDP-DCLK1-sh RNA细胞株DCLK-1、MRP1蛋白及m RNA的表达量,结果证实与SGC7901/DDP-control-sh RNA相比,SGC7901/DDP-DCLK1-sh RNA细胞株中DCLK-1、M RP1蛋白及m RNA的表达明显下降(P<0.05),两者表达差异有统计学意义;SGC7901/DDP与SGC7901/DDP-control-sh RNA两组细胞株之间表达无差异(P>0.05)。4.MTT实验发现与SGC7901/DDP-control-sh RNA相比,SGC7901/DD P-DCLK1-sh RNA对(顺铂、紫杉醇、5-FU)IC50值及耐药指数均有明显的下降(P<0.05),两者差异有统计学意义;SGC7901/DDP与SG C7901/DDP-control-sh RNA两组细胞株之间无统计学差异(P>0.05)。结论:1.通过浓度梯度法建立人胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP。2.DCLK-1与MRP1在胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP中均高表达,DCLK-1与MRP1表达呈正相关性。3.下调DCLK1导致胃癌细胞耐药性下降,可能与下调MRP1有关。