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大肠杆菌是医学和兽医临床上最常见的病原菌之一,给人类的健康和畜牧业的发展造成了严重的损害。抗菌药在控制大肠杆菌感染方面发挥了重要作用,但随着抗菌药物的广泛应用,导致大肠杆菌耐药株尤其是多重耐药菌株不断出现,大肠杆菌的耐药问题已成为影响人类健康和养殖业发展的重要因素。细菌耐药机制——整合子(integron)系统得到研究者们的广泛注意,并取得了很大的进展。细菌通过整合子系统,通过整合酶的作用,捕获外来的耐药基因,并在位于整合子上游的启动子作用下得到表达,使细菌具有耐药及多重耐药性,造成细菌多重耐药性的传播。在整合子介导细菌的耐药机制中,第一类整合子起着非常重要的作用。大部分的耐药基因水平传播都是由Ⅰ类整合子介导的。因此调查研究大肠杆菌耐药性、扩增Ⅰ整合酶基因检测Ⅰ型整合子分子流行病学对从基因水平上探讨细菌耐药性转移的分子机制具有重要的理论和实践意义。
本文从黑龙江地区某养猪场分离出20株大肠杆菌,某鸡厂分离20株大肠杆菌,分析大肠杆菌对14种抗生素的耐药特点。采用PCR方法检测整合酶基因intⅠ,并对整合酶基因测序和序列分析。研究养殖场大肠杆菌Ⅰ型整合子分子流行病学特点。
14种抗菌药物的药敏试验结果表明:40株大肠杆菌均表现多重耐药,对新霉素、氯霉素100%耐药;对庆大霉素、链霉素、洛美沙星、诺氟沙星和阿莫西林的耐药率超过90%,对卡那霉素、壮观霉素、恩诺沙星、环丙沙星耐药率也较高,对头孢氨苄和呋喃唑酮相对其它抗生素而言耐药率较低。耐药谱集中在9~13耐,其中10耐、11耐、12耐菌株居多。克隆整合酶基因片断,大小约为280bp,与预计结果相符,动物源性大肠杆菌中Ⅰ型整合子流行较普遍,检出率为55%,其中鸡源大肠杆菌Ⅰ型整合子检出率较高为65%,猪源检出率为50%。
结果表明所分离大肠杆菌对抗菌药存在严重的耐药性,耐药谱不断增加,其耐药性亦不断发生变迁。采用PCR方法成功克隆整合酶基因片断,并采用整合酶PCR方法检测大肠杆菌Ⅰ型整合子流行病学特点及大肠杆菌中intⅠ基因,本研究结果为大肠杆菌耐药性监测提供了一种实用、快速、准确的检测方法。