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目的类固醇激素受体辅激活子-1(SRC-1)在体内广泛表达,可促进肿瘤发展,参与生殖系统的发育,维持能量代谢平衡,且在心血管系统中发挥重要作用。SRC-1能抑制新生内膜的形成,发挥保护血管的作用。缺少SRC-1将引起ATP合成障碍、心肌收缩力降低、心肌细胞功能失调甚至心衰。此外SRC-1多态性可能是造成川崎病患者产生冠脉瘤的潜在原因。血管内皮细胞作为具有活跃代谢功能的细胞,可作为屏障,也可分泌血管收缩因子和舒张因子,还可维持血液流动状态和凝血功能平衡,另外还参与炎症反应。内皮细胞功能紊乱与高血压、动脉粥样硬化等多种心血管疾病的发生发展密切相关。本实验目的在于研究敲低SRC-1对离体血管内皮细胞功能的影响。方法于6孔板中加入等量人脐静脉内皮细胞(HUVEC),培养过夜。利用Lipofectamine 2000转染试剂将3条siRNA(siCtrl、siSRC-1-1和siSRC-1-2)转染入HUVEC中8h后,换完全培养液(含重组人源碱性成纤维细胞生长因子,bFGF,10ng/ml)培养62h。收集细胞上清液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测内皮素-1(ET-1)的浓度、用试剂盒检测一氧化氮(NO)的浓度。收集HUVEC,提取蛋白质,用Western blot检测SRC-1、血管性血友病因子(vWF)、一氧化氮合酶(eNOS)、p65、p-p65、p38、p-p38的蛋白水平。收集HUVEC,提取RNA,用qRT-PCR检测SRC-1、内皮素-1(ET-1)的mRNA水平。结果Western blot示siRNA使siSRC-1-1、siSRC-1-2的SRC-1蛋白减少[siCtrl(1.03)比siSRC-1-1(0.30),P<0.001;siCtrl(1.03)比siSRC-1-2(0.29),P<0.001]。qRT-PCR示siSRC-1-1、siSRC-1-2上的SRC-1 mRNA减少[siCtrl(1.00)比siSRC-1-1(0.67),P<0.001;si Ctrl(1.00)比siSRC-1-2(0.73),P<0.01]。以上两个结果表明敲低效果良好。Western blot示siSRC-1-1、siSRC-1-2上的vWF蛋白高于siCtrl[siCtrl(1.05)比siSRC-1-1(1.76),P<0.01;siCtrl(1.05)比siSRC-1-2(2.11),P<0.001]。ELISA示敲低SRC-1后,ET-1的分泌量增加[siCtrl(3.13)比siSRC-1-1(19.52),P<0.001;siCtrl(3.13)比siSRC-1-2(17.95),P<0.01]。qRT-PCR示敲低SRC-1后,ET-1的mRNA水平增加[siCtrl(1.00)比siSRC-1-1(3.35),P<0.01;siCtrl(1.00)比siSRC-1-2(3.44),P<0.01]。敲低SRC-1后,NO的分泌量不变[siCtrl(31.83)比siSRC-1-1(30.62),P>0.05;si Ctrl(31.83)比siSRC-1-2(30.25),P>0.05]。Western blot示eNOS、p65、p-p65、p38、p-p38的表达量于siCtrl、siSRC-1-1、siSRC-1-2三者间无差异[eNOS:siCtrl(1.01)比siSRC-1-1(0.97),P>0.05;siCtrl(1.01)比siSRC-1-2(1.06),P>0.05;p-p65/p65:siCtrl(0.97)比siSRC-1-1(0.96),P>0.05;siCtrl(0.97)比siSRC-1-2(0.93),P>0.05;p-p38/p38:siCtrl(0.98)比siSRC-1-1(0.94),P>0.05;siCtrl(0.98)比siSRC-1-2(1.05),P>0.05]。结论SRC-1具有保护VEC的作用,且SRC-1可能参与血管舒张的过程。因此SRC-1参与调节血管内皮细胞的功能,缺少SRC-1将导致血管内皮细胞功能紊乱。