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目的：建立一个稳定的大鼠卵巢低温机械灌注(HMP)模型，并对灌注后卵巢组织进行移植，评估卵泡发育、激素水平和微血管建立等情况，探讨HMP对卵巢功能的保护作用。
方法：研究分为两部分，第一部分：大鼠卵巢低温机械灌注模型的建立和最佳灌注流量的探索。将SD大鼠随机分为三组，每组6只，获取大鼠卵巢，分别在灌注流量设定为0.2ml/min、0.4ml/min和0.6ml/min下，灌注含1%亚甲基蓝的林格氏液30min，观察大体观后进行病理组织检查，使用显微镜观察血管和卵泡形态情况。第二部分：探讨低温机械灌注保存卵巢的实验研究。在第一部分基础上确定合适流量参数后，将SD大鼠分为四组，每组6只，分别为正常对照组(Fresh组)、阴性对照组(OX组)、静态冷保存组(CS组)和低温机械灌注组(HMP组)，并且采用两种不同的保存液，分别命名为CS1、HMP1(使用保存液1)、CS2、HMP2(使用保存液2)组,每组6只。保存液1成分为DMEM/F-12培养基、10%胎牛血清、10μg/ml胰岛素、10μg/ml转铁蛋白和50mIU/mlFSH，保存液2为林格氏液。冷保存组卵巢放于4℃保存液中保存4h，低温机械灌注组为卵巢先于4℃保存2h后在进行2h的低温机械灌注，随后各组卵巢保存结束后移植到受体大鼠左侧肾包膜下，收集移植1周后卵巢标本及血液。正常对照组(Fresh组)为不进行低温保存；阴性对照组(OX组)为大鼠卵巢摘除。检测血清AMH水平，卵巢组织病理学情况，卵泡计数水平，CD31和Ki67的免疫组化染色水平。观察比较冷保存和低温机械灌注对卵巢功能的影响。
结果：一、在用不同流量含亚甲基蓝的林格氏液灌注30分钟后，病理学检测结果显示，0.4ml/min组和0.6ml/min组中卵巢组织有不同程度的水肿，颗粒细胞之间间隙增大，血管扩张明显；0.2ml/min组卵泡形态完整，无明显水肿，血管无明显扩张。二、卵巢组织移植7天后，可以观察到在肾包膜下和移植物表面均有的新生血管的形成。各组HE染色切片中均检测到发育不同阶段的完整卵泡、新生血管和黄体。卵泡计数结果显示：与Fresh组(26.3±3.4)相比，CS组和HMP组的卵泡数量显著减少，而冷保存组和低温机械灌注组比较(CS1:4.3±0.9,HMP1:7.7±3.3,CS2:8.3±1.9;HMP2:7.0±0.6)，卵泡数量没有明显的统计学差异(P＞0.05)。血清AMH水平检测：与OX组(2.75±0.19ng/ml)相比，Fresh组(7.39±1.04ng/ml)和HMP1组(7.93±1.31ng/ml)血清AMH水平明显增高，并且HMP1组(7.93±1.31ng/ml)明显高于CS1组(4.39±0.43ng/ml)，具有统计学意义(P＜0.05)。另外，冷保存组和低温机械灌注组之间移植后卵泡数量和Ki67表达比较没有明显统计学差别(P＞0.05)；HMP组的CD31阳性区域面积百分比均高于CS组(HMP1：11.69±1.18；CS1：7.40±0.74；HMP2：12.29±0.96；CS2:7.49±0.80)，具有统计学意义(P＜0.05)。
结论：流量0.2ml/min可作为大鼠卵巢HMP合适的灌注参数。相对于静态冷保存，HMP是一种更佳的保存卵巢方式，它能促进移植后卵巢的再血管化，改善卵巢功能，但是未解决因为组织移植导致的卵泡丢失的问题。使用以细胞培养液为基础的含有激素的保存液保存卵巢，效果优于林格氏液。HMP具有安全有效地应用于卵巢移植的前景。
方法：研究分为两部分，第一部分：大鼠卵巢低温机械灌注模型的建立和最佳灌注流量的探索。将SD大鼠随机分为三组，每组6只，获取大鼠卵巢，分别在灌注流量设定为0.2ml/min、0.4ml/min和0.6ml/min下，灌注含1%亚甲基蓝的林格氏液30min，观察大体观后进行病理组织检查，使用显微镜观察血管和卵泡形态情况。第二部分：探讨低温机械灌注保存卵巢的实验研究。在第一部分基础上确定合适流量参数后，将SD大鼠分为四组，每组6只，分别为正常对照组(Fresh组)、阴性对照组(OX组)、静态冷保存组(CS组)和低温机械灌注组(HMP组)，并且采用两种不同的保存液，分别命名为CS1、HMP1(使用保存液1)、CS2、HMP2(使用保存液2)组,每组6只。保存液1成分为DMEM/F-12培养基、10%胎牛血清、10μg/ml胰岛素、10μg/ml转铁蛋白和50mIU/mlFSH，保存液2为林格氏液。冷保存组卵巢放于4℃保存液中保存4h，低温机械灌注组为卵巢先于4℃保存2h后在进行2h的低温机械灌注，随后各组卵巢保存结束后移植到受体大鼠左侧肾包膜下，收集移植1周后卵巢标本及血液。正常对照组(Fresh组)为不进行低温保存；阴性对照组(OX组)为大鼠卵巢摘除。检测血清AMH水平，卵巢组织病理学情况，卵泡计数水平，CD31和Ki67的免疫组化染色水平。观察比较冷保存和低温机械灌注对卵巢功能的影响。
结果：一、在用不同流量含亚甲基蓝的林格氏液灌注30分钟后，病理学检测结果显示，0.4ml/min组和0.6ml/min组中卵巢组织有不同程度的水肿，颗粒细胞之间间隙增大，血管扩张明显；0.2ml/min组卵泡形态完整，无明显水肿，血管无明显扩张。二、卵巢组织移植7天后，可以观察到在肾包膜下和移植物表面均有的新生血管的形成。各组HE染色切片中均检测到发育不同阶段的完整卵泡、新生血管和黄体。卵泡计数结果显示：与Fresh组(26.3±3.4)相比，CS组和HMP组的卵泡数量显著减少，而冷保存组和低温机械灌注组比较(CS1:4.3±0.9,HMP1:7.7±3.3,CS2:8.3±1.9;HMP2:7.0±0.6)，卵泡数量没有明显的统计学差异(P＞0.05)。血清AMH水平检测：与OX组(2.75±0.19ng/ml)相比，Fresh组(7.39±1.04ng/ml)和HMP1组(7.93±1.31ng/ml)血清AMH水平明显增高，并且HMP1组(7.93±1.31ng/ml)明显高于CS1组(4.39±0.43ng/ml)，具有统计学意义(P＜0.05)。另外，冷保存组和低温机械灌注组之间移植后卵泡数量和Ki67表达比较没有明显统计学差别(P＞0.05)；HMP组的CD31阳性区域面积百分比均高于CS组(HMP1：11.69±1.18；CS1：7.40±0.74；HMP2：12.29±0.96；CS2:7.49±0.80)，具有统计学意义(P＜0.05)。
结论：流量0.2ml/min可作为大鼠卵巢HMP合适的灌注参数。相对于静态冷保存，HMP是一种更佳的保存卵巢方式，它能促进移植后卵巢的再血管化，改善卵巢功能，但是未解决因为组织移植导致的卵泡丢失的问题。使用以细胞培养液为基础的含有激素的保存液保存卵巢，效果优于林格氏液。HMP具有安全有效地应用于卵巢移植的前景。