【摘 要】
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目的:研究孕期B[a]P暴露对转录因子AhR与ARNT2之间相互作用的影响以及异源二聚体AhR-ARNT2在BDNF基因转录中的作用。方法:购入3月龄雌雄比例1:1的SD大鼠120只,怀孕大鼠随机分为空白组、橄榄油组,以及10、20和40 mg/kg剂量组。60只孕鼠按照随机数字法分为每组12只,受孕后1719d腹腔注射相应剂量B[a]P。使用蛋白免疫印迹法检测各年龄段子鼠大脑皮质内AhR蛋白表达
【基金项目】
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国家自然科学基金“增强子与启动子相互作用调控孕期多环芳烃暴露所致子代智力发育迟缓的队列和机制研究（编号:82073526）”；
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目的:研究孕期B[a]P暴露对转录因子AhR与ARNT2之间相互作用的影响以及异源二聚体AhR-ARNT2在BDNF基因转录中的作用。方法:购入3月龄雌雄比例1:1的SD大鼠120只,怀孕大鼠随机分为空白组、橄榄油组,以及10、20和40 mg/kg剂量组。60只孕鼠按照随机数字法分为每组12只,受孕后1719d腹腔注射相应剂量B[a]P。使用蛋白免疫印迹法检测各年龄段子鼠大脑皮质内AhR蛋白表达水平。蛋白质免疫共沉淀法测定各年龄段子鼠皮质内AhR与ARNT2之间的相互作用情况。使用染色质免疫共沉淀联合PCR法测定各年龄段子鼠皮质内AhR-ARNT2与BDNF启动子的结合情况。使用RT-PCR法测定各年龄段子鼠皮质内BDNF m RNA的表达。结果:1、蛋白免疫印迹实验结果显示,在PND1、PND14中,相较于空白组,40mg/kg组的AhR表达升高（P<0.05）。在PND7中,相较于空白组,20mg/kg、40mg/kg组AhR表达升高（P<0.05）。其余年龄段内各剂量组AhR表达差异没有统计学意义。表明孕期B[a]P暴露会使出生早期子鼠大脑皮质内AhR表达升高。2、蛋白质免疫共沉淀实验结果显示,PND1、PND7子鼠皮质内20mg/kg组和40mg/kg组中AhR和ARNT2相互作用增强（P<0.05）。在PND14中,20mg/kg组相比于其他剂量组AhR-ARNT2相互作用增强但没有统计学意义。表明大鼠发育早期皮质内孕期B[a]P暴露导致AhR-ARNT2相互作用水平增强。3、染色质免疫共沉淀联合PCR结果显示,在PND1,20mg/kg组和40mg/kg组中BDNF转录本1的启动子与AhR-ARNT2的结合量增加（P<0.05）。在PND7,20mg/kg组BDNF转录本1启动子与AhRARNT2的结合量增加（P<0.05）。4、RT-PCR结果显示,在PND1,40mg/kg组BDNF m RNA表达下降（P<0.05）。在PND7,20mg/kg和40mg/kg组BDNF m RNA的表达下降（P<0.05）。提示AhR-ARNT2二聚体与BDNF启动子的结合可能会导致BDNF m RNA表达下降。结论:1、孕期B[a]P暴露使子代大鼠皮质内AhR表达升高。2、孕期B[a]P暴露使AhR-ARNT2相互作用增强。3、异源二聚体AhR-ARNT2与BDNF启动子结合导致BDNF基因的转录功能下降。
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