乳腺癌新型血清标志物的检测及其临床意义研究　　 本文针对目前乳腺癌研究中的一个热点——乳腺癌新型血清标志物的检测及其临床意义进行了探讨，共由两部分研究组成。　　 随着人类对乳腺癌发生发展机制的深入了解，不断有新的生物学标志物被发现。近年来，研究发现性别决定区Y框蛋白2(SOX2)在乳腺癌的发生过程中起重要作用。组织学检测证明SOX2在乳腺癌组织中高表达。之前有研究发现，SOX2是一种新的肿瘤相关自身抗原，其自身抗体在多种肿瘤尤其是小细胞肺癌(SCLC)中具有一定的临床应用价值。因此，我们推断在乳腺癌患者血清中同样可能存在针对SOX2的自身抗体，并且这一抗体可能具有潜在的临床J、适用价值。在第一部分中我们研究了乳腺癌患者和对照血清中的抗SOX2抗体的分布及其临床意义。本研究利用聚合酶链反应(PCR)方法扩增SOX2序列并将其克隆入原核表达载体pET28b，获得重组表达载体pET28b-SOX2。然后利用大肠杆菌原核表达系统表达了SOX2蛋白，并以Ni2+亲和层析纯化目的蛋白。最后以纯化的SOX2蛋白为抗原建立了间接酶联免疫吸附试验(FLISA)方法。通过对乳腺痛患者、乳腺良性疾病患者以及健康女性血清中抗SOX2抗体的检测，我们发现乳腺癌患者抗SOX2抗体的阳性率(18.4％)显著高于乳腺良性疾病患者(6.4％∶P=0.011)和健康人(2.6%∶P＜0.0001)。统计学分析表明，抗SOX2抗体与肿瘤的分化程度(P=0.021)和淋巴结转移状况(P=0.021)有一定的联系。通过与糖类抗原15-3(CA15-3)、癌胚抗原(CEA)和组织多肽特异抗原(TPS)等临床应用的乳腺癌血清标志物进行比较，我们发现抗SOX2抗体区分乳腺癌及乳腺良性疾病的敏感性和特异性明显优于上述标志物。本研究首次对较大样本量的乳腺癌患者中抗SOX2抗体的分布情况进行分析，结果显示其在乳腺癌患者血清中的出现具有潜在的临床应用价值。　　 microRNA(miRNA)是一种长度约为22nt，具有基因调控功能的小分子非编码RNA。在肿瘤患者的循环系统中，某些miRNA指标的水平出现异常升高或降低，这种异常变化可能反映了肿瘤的进展。更为重要的是，循环miRNA在血液中的稳定性很好，且应用实时荧光PCR技术可以快速有效地检测到其水平的变化。因此，特定的血清miRNA检测可能为乳腺癌的诊断和治疗提供新的思路和方法。在第二部分中我们研究了乳腺癌患者几种血清miRNA的水平及其临床意义。本研究在建立实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）的基础上，对乳腺癌患者及健康女性血清中几种在乳腺癌的发生发展中起重要作用的miRNA，即miR-10b、miR-21、miR-34a、m1R-125b、miR-155和miR-200c等的水平进行了检测，结果以2-ΔΔCt表示。相对定量结果显示，乳腺癌患者中显著升高的miRNA有miR-10b(P=0.0010)、miR-21(P＜0.0001)和miR-155(P＜0.0001)。三种miRNA指标均具有一定的诊断能力：受试者工作特征(ROC)曲线分析可知miR-10b、miP-21和miR-155的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.660、0.772和0.801，二种指标联合检测的AUC为0.834;可以用于区分乳腺癌患者和健康女性。此外，本研究还收集了经手术治疗和化疗的乳腺癌患者血清，并分析了治疗对miRNA水平的影响。结果显示，肿瘤切除以及其后的辅助化疗可导致血清miR-10b、miR-21和miR-155的水平降低，趋于正常女性的水平，这一结果与患者的治疗效果有关。综上所述，本研究检测了乳腺癌患者血清中多个miRNA指标的分布情况，结果显示miR-10b、miR-21和miR-155异常升高，它们水平的差异能够有效区分乳腺癌患者和健康女性。另外，我们首次发现患者血清中异常升高的miRNA（miR-10b. miR-21和miR-155）水平会随肿瘤切除和辅助化疗发生变化，动态监测治疗前后miRNA有助于了解治疗效果。