湖南省葡萄霜霉病的发生规律调查及病原菌遗传多样性研究

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葡萄霜霉病(Grape Downy Mildew)是葡萄的四大病害之一,该病起源于北美洲,于1834年被发现。我国在1899年才首次有其记录。该病是由葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)’引起,发病后严重影响葡萄的产量和质量。本研究通过调查湖南省葡萄霜霉病发生情况以及天气因素对病害发生的影响,为霜霉病的防治提供一定的依据;此外,采集湖南、湖北、江西和福建4省葡萄种植地区具有典型葡萄霜霉病症状的葡萄叶片分离葡萄霜霉病菌,测试其对不同葡萄品种的致病性以及4种杀菌剂的抗药性,并对其遗传多样性进行研究。(1)通过2012年7月对湖南省9个市36个地点进行葡萄霜霉病发生情况调查,结果表明:欧美杂交种葡萄的抗病性强于欧亚种;避雨栽培能够有效的降低霜霉病的发病率。9个地区中,葡萄霜霉病在怀化和湘西自治州发病最重,在常德、长沙和株洲发病最轻。(2)2012年和2013年对湖南省怀化市靖州县葡萄霜霉病的发生规律进行定点、定期的系统调查,并在此基础上分析相关气象因子对病害发生的影响。结果发现:病害在13~28℃温度范围内均可发生,最适为20~25℃。在20℃下,病害的发生随着温度的降低而减轻;在25℃以上则随着温度的上升而减轻;相对湿度达到65%以后病害才会发生,随后与之成正相关;降雨量大和降雨频率高对霜霉病的流行至关重要要。对该地区葡萄生长期间的气象因素进行多元回归分析,建立该地区葡萄霜霉病预测模型,用此模型预测该地区葡萄霜霉病的病情指数,在2012年和2013年的准确度分别为77.18%和81.77%。(3)从湖南、江西、福建和湖北4个省份共得到20株葡萄霜霉病菌,通过离体叶盘接种法测定了20株葡萄霜霉病菌株对5个不同葡萄品种的致病能力,不同来源地菌株的致病性存在一定差异,结果表明,源于福建省南平市的菌株(NP-2)致病性最强,从源于湖南省长沙市的菌株(CS-1)致病性最弱。(4)4种杀菌剂对不同菌株的毒力测定发现,烯酰吗啉的ECso最高值为3.82μg/ml,最低值为2.57μg/ml,平均值为3.23μg/ml;嘧菌酯EC5o最高值为9.22μg/ml,最低值为6.14μg/ml,平均值为8.25μg/ml;醚菌酯EC5o最高值为14.08μg/ml,最低值为9.62μg/ml,平均值为12.24μg/ml;甲霜灵ECso最高值为30.57μg/ml,最低值为19.88μg/ml,平均值为25.96μg/ml。表明这4种杀菌剂对葡萄霜霉病菌株具有良好的抑制效果。(5)利用ITS序列、β-tubulin)序列和CytB序列引物对20个葡萄霜霉病菌株进行PCR扩增,分别得到790bp、800bp和400bp的目的条带,测序后构建系统发育树分析其遗传多样性。结果分析显示:湖南省四个地方的霜霉病菌株亲缘关系较近,武汉、萍乡和南平三个地区的菌株之间也有一定的亲缘关系。但是个别菌株表现出的亲缘性不一致。三者都能区分亲缘关系较近的不同种属的菌株,但Cyt b gene序列的辨析度最高,分类效果最清晰,在区分同种属亲缘关系更紧密的菌株时也能发挥不小的作用。
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