基于Rho/Rocks通路研究桃红四物汤对产后病血瘀证大鼠活血祛瘀的作用机制

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目的通过观察桃红四物汤(Taohong Siwu decoction,TSD)对产后病血瘀证模型大鼠的治疗效果、对促凝血与纤溶系统以及Rho/Rocks通路上相关指标的影响,探讨TSD活血化瘀、养血调经的作用及其作用机制,为阐释其临床疗效提供实验依据。方法1.考察TSD对产后病血瘀证模型大鼠的治疗作用:对合格的SD大鼠进行适应性喂养1周后称重、标记。将成年雌鼠与雄鼠以2∶1合笼,次日晨行阴道栓和阴道涂片光镜检查,以发现阴道栓或精子的当天为妊娠第1天。于妊娠第7天分别灌胃米非司酮和米索前列醇,复制产后血瘀大鼠模型。本部分研究共设6个组:正常对照组、阳性对照组、模型对照组、TSD高中低剂量组。造模成功后的第二天,各组大鼠按剂量灌胃给药,连续7天。末次给药后40min,麻醉大鼠,腹主动脉取血,测血液流变学指标,血小板聚集率,纤溶系统指标(tPA/PAI-1);处死动物后取其一侧子宫组织石蜡包埋切片后用于病理形态学观察,另一侧子宫组织石蜡包埋切片后采用免疫组化法考察子宫微血管密度(MVD)。2.探讨TSD的补血养血作用:设6个组(同前),经腹主动脉取血检查血红蛋白含量、红细胞数目等常见生化指标。3.对TSD活血化瘀分子机制的研究:设5个组:正常对照组、模型对照组、给药组(TSD9.0g/kg)、抑制剂(法舒地尔10mg/kg)组、药物+抑制剂组;检测血浆LPA含量的变化以反映血瘀的形成及转归,检测Rho/Rocks信号通路上相关蛋白的表达,探讨TSD活血祛瘀分子机制。结果1.治疗作用有统计学意义,表现为:1)提高模型大鼠红细胞数目和血红蛋白含量;2)降低大鼠血小板聚集率;3)对纤溶系统的影响观察到其能提高模型大鼠血浆tPA,降低血浆PAI-1的含量;4)子宫组织病理切片显示模型大鼠子宫形态学发生改变,子宫组织免疫组化显示增加了模型大鼠MVD阳性表达。2.分子机制:TSD可降低血浆中血栓形成标示物LPA含量(P<0.05),进一步抑制LPA/Rho/Rocks/PAI-1信号途径,从而使得LPA/Rho/Rocks/PAI-1通路上的相关因子表达降低。TSD与Rocks抑制剂法舒地尔联合应用,抑制作用更明显。结论研究结果提示TSD对产后血瘀证模型大鼠有良好的治疗作用,其活血祛瘀作用的分子机制可能与其抑制了Rho/Rocks信号通路的传导有关。
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