罗汉果甜苷V人工抗原的制备及免疫学特性研究

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目的:制备MogV-HS-BSA和MogV-HS-HSA两个人工抗原,建立MogV竞争性抑制酶联免疫检测法,筛选出分泌抗MogV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为MogV单克隆抗体应用和高MogV含量新品种的培育提供技术基础。方法:(1)SA与MogV反应生成MogV-HS得到半抗原;将半抗原分别与BSA、HSA偶联,得到MogV-HS-BSA和MogV-HS-HSA两个人工抗原。用红外光谱(IR)和紫外光谱(UV)判断人工抗原偶联情况与结合比。(2)用MogV-HS-BSA免疫3只BALB/c小鼠获得抗血清,用MogV-HS-HSA为包被抗原,检测血清抗体效价和特异性。(3)用MogV-HS-BSA免疫BALB/c小鼠高效价抗血清,建立MogV竞争性抑制酶联免疫检测法。(4)取经MogV-HS-BSA免疫获得的最高效价抗血清的BALB/c小鼠脾脏与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选出能分泌抗MogV单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果:(1)合成的人工抗原MogV-HS-BSA中MogV-HS与载体蛋白BSA的结合比约为44:1:合成的人工抗原MogV-HS-HSA中MogV-HS与载体蛋白HSA的结合比约为64:1。(2)3只小鼠的抗血清效价分别为1:128000、1:64000、1:8000,抗血清具有抗MogV特异性。(3)包被抗原工作浓度为1μg/ml,血清最佳稀释倍数为1:8000,在此工作浓度下,MogV浓度在1×10-4-1μg/ml范围内,得回归方程y=-0.158x+0.298, r2=0.982。(4)筛选得到3孔阳性杂交瘤细胞,经过亚克隆,得到1株能稳定分泌抗MogV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结论:(1)成功合成了MogV-HS、MogV-HS-BSA和MogV-HS-HAS。(2)人工抗原MogV-HS-BSA有较好的免疫原性,免疫小鼠获得的抗血清效价高,特异性好。(3)成功建立了MogV含量竞争性抑制酶联免疫检测法。(4)获得了能分泌抗MogV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
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