人血清白蛋白(HSA)主要由人体肝脏产生,是血浆中含量最丰富的蛋白质,其对维持机体正常功能,以及治疗某些疾病具有重要作用。同时HSA还是许多疾病重要的生物指标。对于HSA检测的方法,主要有放射免疫法、酶联免疫吸附测定法、免疫浊度法等,很多方法往往都依赖于抗体与抗原的特异性结合,特别是应用于复杂环境或者微量检测时,所使用的抗体更要具有稳定、可靠的性质,才能实现对HSA准确、特异、灵敏的检测。因此,获取特异性结合HSA的单克隆抗体(mAb)或其编码基因,以对其进行分析或者改造,对HSA检测及相关疾病的诊断具有重要意义。抗体可变区或全长基因信息的获取,对于进行抗体工程和抗体功能鉴定分析至关重要。本研究开发了一个完整的工作流程,使研究人员能够从分泌抗HSA单克隆抗体的单个杂交瘤细胞中,准确鉴定出mAb对应的全长重链与轻链免疫球蛋白(Ig)基因序列。主要内容如下:利用Smart-seq2单细胞测序技术,对杂交瘤细胞2F10进行单细胞转录组测序,并利用BASIC,rnaSPAdes,Igfinder等分析工具,对获得的数据进行转录组拼接,经过比对和筛选,最终从中分离出了一条重链和一条轻链(HC和LC)序列。应用传统RT-PCR技术对抗体可变区进行克隆,对单细胞转录组分析结果进行验证。结果表明,单细胞转录组分析得到的Ig基因序列与通过RT-PCR获取的序列完全相同。之后将获得的Ig基因序列克隆到真核表达载体,并在HEK293T细胞中进行表达。纯化出的重组抗体特异性识别HSA,并且拥有较强的结合能力。证明通过本方法获得的单克隆抗体序列信息具有可信性。本研究阐述了一种识别和表征抗HSA单克隆抗体重链与轻链基因序列的方法,此方法在单个杂交瘤细胞水平进行,且具有高准确度。我们预期该方法也可以应用于其他杂交瘤细胞系或者从其他物种分离的单个淋巴细胞,这将有助于抗体特性的鉴定,并促进抗体工程的发展。