胚胎干细胞和膀胱癌细胞中LIN28A抑制LAMP1蛋白表达的研究

来源 :广州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lixin200513137149
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【目的】:膀胱癌是临床泌尿外科最常见的肿瘤之一,近年来,我国膀胱癌的发病率越来越呈现出上升的趋势。膀胱癌的早期诊断和分子靶向一直是其治疗的难点。越来越多的研究人员认为,肿瘤细胞和胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)可能具有相似的功能状态,此两种细胞中存在一些基因的共表达。LIN28A是胚胎干细胞中调节细胞时序性和细胞分化的关键因子之一,其长期被认为是胚胎干细胞中蛋白翻译的促进剂。而LIN28A同时在许多肿瘤细胞中表达并与人类肿瘤发生发展密切相关,其可参与到肿瘤细胞发育的各阶段,包括细胞的增殖、迁移、侵袭等。近年有文献报道LIN28A对胚胎干细胞中内质网(ER)相关蛋白的翻译起到抑制作用。本研究组选取LIN28A以及ER相关蛋白LAMP1作为研究对象,旨在验证LIN28A对LAMP1翻译的影响并对比胚胎干细胞和肿瘤细胞功能状态的异同,同时研究LIN28A在膀胱癌发生、发展中的病理生理功能,为膀胱癌早期诊断、靶向治疗,研制新的基因药物提供重要的实验依据。  【方法】:我们使用DNA电泳技术检测LIN28A和LAMP1在膀胱癌细胞系(UM-UC3、5637、SW780)细胞中的表达,同时使用免疫荧光定位技术检测它们在细胞内表达的部位。使用RNAi技术在胚胎干细胞和膀胱癌细胞中敲减LIN28A后,用qRT-PCR和western blot实验分别在mRNA水平和蛋白水平验证LAMP1表达情况的改变;在三种膀胱癌细胞中使用免疫共沉淀(CO-IP)实验来验证体外LIN28A和LAMP1的结合能力;使用CCK-8实验用来检测LIN28A对膀胱癌细胞增殖的影响;Transwell和划痕实验用来验证LIN28A对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响。  【结果】:LIN28A和LAMP1在胚胎干细胞和人类膀胱癌细胞系(UM-UC3、5637、SW780)都表达,且主要都表达于细胞胞浆内。胚胎干细胞和膀胱癌细胞中敲减LIIN28A后LAMP1 mRNA水平不发生改变,而其蛋白表达都增高。在三种膀胱癌细胞中使用 LIN28A抗体都可以检测到 LAMP1蛋白,反之亦然。转染 LIN28A siRNA后,人类膀胱癌细胞系细胞UM-UC3、5637和SW780在24h后迁移率分别下降了52.5%(p<0.005)、56.5%(p<0.005)和45.3%(p<0.005);其在24h,48h和72h时的增殖率分别下降了7.9%(24h)、15.9%(48h)、25.0%(72h)(P<0.05);11.8%(24 h)、16.2%(48h)、15.9%(72h)(P<0.05);10.1%(24h)、15.7%(48h)、23.5%(72h)(P<0.05),而48h后细胞侵袭率分别下降了75.5%(p<0.005)、53.5%(p<0.005)和63.3%(p<0.005)。  【结论】:LIN28A在胚胎干细胞和人类膀胱癌细胞系(UM-UC3、5637、SW780)细胞中具有相似的功能,其都可在不改变LAMP1 mRNA表达水平的情况下抑制LAMP1蛋白表达。LIN28A可促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭。总之,LIN28A是膀胱癌发生发展过程中关键基因之一,其在胚胎干细胞和肿瘤细胞中具有相似作用。
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