花生突变体创制及脂磷酸磷酸酶基因家族的表达研究

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花生(Arachis hypogaea L.)又名“长生果”、“落花生”,起源于南美洲。在我国,它不仅是重要的经济作物而且是北方地区的主要油料作物。长期以来,我国花生的产量稳居世界首位,然而优质专用品种缺乏所带来的经济效益相对较低。因此,实现花生种质突破,培育高产优质花生新品种是花生育种工作的重要目标。其中利用诱变手段创制突变种质是作物种质改良和理论学研究的重要途径。本文在前人研究基础上,对生产上广泛应用的花生品种(质)加以探索与改良,为今后培育综合性状优良的花生品种开辟了新的道路。本文主要内容如下:一、以鲁花6号、花育19号、花育20号、花育23号、花育32号、花育33号、四粒红、龙花生8个栽培花生品种(质)作为试验材料,利用甲基磺酸乙酯(EMS)诱变、60Co-γ射线辐照或快中子辐照分别对花生种子进行处理,获得了一个含有1623份种质的花生突变体库。二、对突变体的重要农艺性状和主要品质性状进行观察、测量并进行统计学分析,发现总果重与出米率呈极显著正相关,与叶片长度呈极显著负相关。油酸含量与棕榈酸含量呈极显著负相关,与油亚比(O/L)呈极显著正相关。通径分析表明,各农艺性状对总果重的影响大小顺序为:荚果长度(1.202)>叶片宽(0.936)>主茎高(0.240)>单株荚果数(0.167)>半斤果数(-0.624)>百果重(-0.641)>主茎粗(-1.355)。各品质性状对油亚比的影响大小顺序为:油酸(1.522)>棕榈酸(0.387)>含油量(-0.271)>蛋白质(-0.273)>蔗糖(-0.698)。三、采用竞争性等位基因特异性PCR(KASP)检测发现,154份花育19号高油酸突变体的FAD2B基因的442bp位点插入了一个“A”。突变体油酸变幅为66.46-80.30%,亚油酸变幅1.29-13.34%,油亚比变幅4.98-62.31。四、从花生品种花育33号中克隆得到8个脂磷酸磷酸酶(LPP)基因,分别编码335、322、284、228、198、227、403和293个氨基酸,均属于LPPs蛋白质家族。对克隆到的基因进行理化性质和系统发育分析,同时通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测了AhLPP基因在花生不同组织、不同发育时期、5种激素和4类非生物逆境胁迫下的表达情况。结果显示,这些基因与其它植物的LPPs蛋白有较高的相似性,可能参与种子油脂的合成。在5种激素与4类非生物胁迫处理下AhLPP2、AhLPPγ、AhLPPε基因均显著诱导表达,其余LPP基因在部分处理下显著诱导表达。为阐明LPP类基因在花生油脂合成和逆境胁迫抗性的功能奠定了理论基础。这些研究与发现为花生遗传改良和功能基因鉴定提供了丰富的试验材料及理论依据。
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