【摘 要】
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目的:本实验以腹腔注射环磷酰胺进行造模,建立与人类相似的DOR大鼠模型,以正常大鼠设为空白组,分别设西药组、中药组、针刺组、针药结合组对DOR大鼠模型进行治疗。本实验以“胞宫藏泻”中医基础理论为指导进行针药组方,旨在观察各组大鼠用药前后子宫内膜组织形态学变化,并检测大鼠血清AMH水平及子宫内膜GLUT4、AKT、miR-223的表达情况,拟从miR-223/AKT/GLUT4信号通路探讨针药并用治
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目的:本实验以腹腔注射环磷酰胺进行造模,建立与人类相似的DOR大鼠模型,以正常大鼠设为空白组,分别设西药组、中药组、针刺组、针药结合组对DOR大鼠模型进行治疗。本实验以“胞宫藏泻”中医基础理论为指导进行针药组方,旨在观察各组大鼠用药前后子宫内膜组织形态学变化,并检测大鼠血清AMH水平及子宫内膜GLUT4、AKT、miR-223的表达情况,拟从miR-223/AKT/GLUT4信号通路探讨针药并用治疗DOR大鼠的作用机制,并提供实验依据。材料与方法:选用健康雌性SD大鼠60只,8-9周龄,体重约200g,适应性喂养一周,以随机数字表法进行分组,分为空白组、模型组、西药组、中药组、针刺组、针药组,共六组,每组10只。除空白组外,其余五组大鼠于动情周期后给予腹腔注射环磷酰胺(50mg/kg/d)一周进行造模,大鼠动情周期通过阴道涂片法进行观察,出现某一期停止或者消失即为造模成功。对造模成功的大鼠分别以DHEA灌胃、加减二仙汤灌胃、针刺关元、太冲、太溪穴、加减二仙汤灌胃并配合针刺,连续干预三周。观察大鼠子宫内膜组织形态学变化,检测大鼠血清AMH值,检测大鼠子宫内膜AKT、GLUT4及miR-223的表达情况。结果:1.苏木素-伊红染色结果显示:空白组光镜下子宫内膜腺体数量多,腺腔扩张,褶皱丰富,体积大,腺体基质丰富,呈簇状排列。模型组子宫内膜上腺体数量少,腺腔小而直,几乎无褶皱,体积缩小,腺体结构异常,无簇状排列,较正常组病理改变明显。西药组:子宫内膜腺体较模型组显著增多,腺腔扩大,褶皱增多,体积有所增大,腺体结构较模型组结构有所改善,呈簇状排列。中药组:与模型组比,子宫内膜腺体数量略有增多,腺腔扩大,褶皱增加,体积略增大,部分可见簇状排列。针刺组:与模型组比,子宫内膜腺体数量略有增多,腺腔略有扩大,褶皱增加,体积略增大,部分呈簇状排列。针药组:子宫内膜腺体较模型组显著增多,腺腔扩大,褶皱增加,体积增大,腺体呈簇状排列,结构较模型组改善明显。2.酶联免疫吸附测定法检测结果显示:与空白组相比,模型组血清AMH含量显著降低(P<0.05);与模型组相比,西药组、中药组、针刺组、针药组含量均显著升高(P<0.05);与中药组相比,针药组含量无统计学意义;与针刺组相比,针药组含量显著增高(P<0.05)。3.蛋白免疫印迹检测法检测结果显示:与空白组相比,模型组大鼠AKT蛋白含量显著降低(P<0.01);与模型组相比,西药组、中药组、针刺组、针药组含量显著升高(P<0.01);与中药组相比,针药组含量显著升高(P<0.01),与针刺组相比,针药组含量显著升高(P<0.01)。与空白组相比,模型组大鼠GLUT4蛋白含量显著降低(P<0.01);与模型组相比,西药组、中药组、针刺组、针药组白含量显著升高(P<0.01);与中药组相比,针药组含量显著增高(P<0.05);与针刺组相比,针药组含量显著增高(P<0.01)。4.实时荧光定量PCR检测结果显示:与空白组相比,模型组大鼠子宫内膜miR-223表达水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,西药组、中药组、针刺组、针药组表达水平显著减低(P<0.01);与中药组相比,针药组表达水平无统计学意义;与针刺组相比,针药组表达水平显著降低(P<0.01)。与空白组相比,模型组大鼠AKT表达水平显著降低(P<0.01);与模型组相比,西药组、中药组、针刺组、针药组大鼠表达水平显著升高(P<0.01);与中药组相比,针药组大鼠表达水平显著升高,与针刺组相比,针药组大鼠表达水平显著增高(P<0.01)。与空白组相比,模型组大鼠子宫内膜GLUT4表达水平显著降低(P<0.01);与模型组相比,西药组、中药组、针刺组、针药组表达水平显著升高(P<0.01);与中药组相比,针药组大鼠表达水平显著升高(P<0.01),与针刺组相比,针药组大鼠表达水平显著增高(P<0.01)。结论:1.针药结合可以改善DOR大鼠子宫内膜组织形态学变化,并调节血清AMH水平。2.针药结合治疗DOR大鼠疗效优于单独中药或针刺疗法。3.针药结合可通过调节miR-223/AKT/GLUT4信号通路改善DOR大鼠子宫内膜容受性,提高大鼠卵巢储备功能。
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