捕食线虫性真菌的分离鉴定及高效菌株的筛选

来源 :石河子大学 | 被引量 : 9次 | 上传用户:dannychan
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家畜消化道线虫长期寄生在动物体内,消耗家畜的营养、对肠道造成机械性损伤而降低饲料报酬,导致家畜生长缓慢、消瘦,畜产品的产量、质量下降等,引起严重的经济损失,对畜牧业生产的危害极大。目前,家畜消化道线虫病的防治主要依赖于化学药物,长期应用化学药物不仅导致虫体产生耐药性,而且还造成药物残留和环境污染,严重危害人类健康。作为线虫的天敌,捕食线虫性真菌是一类重要的线虫自然控制因子。国外的研究证实,捕食线虫性真菌可用于家畜消化道线虫病的防控,是一种有前景的动物—环境友好型疫病防控方法。然而,我国对捕食线虫性真菌的研究相对滞后,目前急需开展捕食线虫性真菌的分离鉴定及其生物学特性等基础性研究工作。为了研发动物消化道线虫病的新型防控生物制剂,本研究对新疆天山北坡牧场土壤样本中捕食线虫性真菌进行了分离、鉴定,测定了分离株的捕食线虫活性和通过动物消化道能力,筛选出能够高效捕杀家畜消化道线虫高效菌株,为本地区家畜消化道线虫病的生物防控奠定基础。研究方法和主要结果如下:1、新疆天山北坡牧场捕食线虫性真菌的分离鉴定:采用微生物学和寄生虫学实验技术,并通过捻转血矛线虫三期幼虫(HaemonchuscontortusL3)诱导对新疆天山北坡牧场土壤样本中捕食线虫性真菌进行了分离、形态学及分子生物学鉴定并初步对其捕食活性进行了研究。结果成功分离出了26株捕食线虫性真菌,其中9株的孢子梗直立、单生、分隔;分生孢子双孢、椭圆形;以粘性三维菌网捕捉线虫。其形态学特征符合少孢节丛孢菌(Arthrobotrysoligospora)。利用PCR技术扩增分离株5.8srDNA-ITS2基因序列,测序后与国内外已知少孢节丛孢菌菌株对比分析,结果分离株与Arthrobotrysoligosporaisolate128香港分离株同源率最高,达到99.69%。进一步证明所分离的捕食线虫性真菌为少孢节丛孢菌。2、少孢节丛孢菌的捕食过程观察及不同条件下对H.contortusL3捕食活性的测定:利用倒置显微镜跟踪观察了少孢节丛孢菌对捻转血矛线虫的捕食过程;测定了少孢节丛孢菌在不同营养浓度(0.0g/L,0.2g/L,0.4g/L,0.6g/L,0.8g/L,1.0g/L,2.0g/L)、环境温度(5℃,10℃,15℃,20℃,25℃,30℃,35℃)及不同幼虫条数(500,1000,2000,3000,4000,5000)条件下的捕食活性。结果显示:①加入H.contortusL36h后开始出现捕食结构;8h后形成简单的捕食性三维菌网;12h时,捕食性结构继续发展,发育成为成熟三维菌网状。②当营养浓度为0.4g/L、环境温度为20℃和幼虫含量达到3000条时,分离株对捻转血矛线虫的捕食率达到最大值,分别为85.25%、89.90%和93.23%。表明所分离的9株少孢节丛孢菌的捕食活性在一定范围内随着营养浓度和环境温度的升高而呈现先增加后减少,并随着幼虫含量的增加而呈现先增加后保持高水平不变的规律性变化。3、少孢节丛孢菌对粪便中线虫的捕食率及通过绵羊消化道后的捕食能力研究:利用在粪便中加入定量线虫,作用一段时间后回收残余线虫的方法,测定了所分离的9株少孢节丛孢菌对绵羊粪便中捻转血矛线虫幼虫的捕食率和将少孢节丛孢菌分生孢子灌服绵羊后对粪便中线虫幼虫的捕食率。结果显示,A-XJ1菌株的捕食活性最高,达到97.6%;B-XJ2,L-XJ12,D-XJ4三菌株次之,为96.9%,96.6%和96.5%;M-XJ13菌株最低,仅为90.8%;而C-XJ3,H-XJ8,J-XJ10,K-XJ11四菌株的捕食活性居中,分别为93.4%,91.8%,93.8%和93.2%。少孢节丛孢菌分生孢子通过绵羊消化道后的试验结果,B-XJ2,C-XJ3,D-XJ4,H-XJ8,J-XJ10,L-XJ12六株少孢节丛孢菌可以顺利通过绵羊消化道,且与对照组相比显著降低了绵羊粪便中捻转血矛线虫幼虫的数量。其中捕食率最高的菌株为B-XJ2,达到78.7%,D-XJ4,L-XJ12两菌株次之,分别为76.9%和76.1%;捕食率最低的为J-XJ10菌株,为72.4%。而另外的C-XJ3和H-XJ8菌株的捕食率分别为74.5%和73.8%。综上结果,本研究鉴定的9株捕食线虫性真菌均为少孢节丛孢菌,且在实验室条件下具有很高的捕食线虫活性,同时还显示出部分菌株通过绵羊消化道后仍保持捕食线虫能力。
其他文献
拟态弧菌可引起水产动物的腹水病,严重危害水产养殖业的健康发展,但目前尚无疫苗用于该病预防。本实验室前期研究已证实外膜蛋白U(OmpU)是拟态弧菌保守性黏附素蛋白之一,该蛋