黑素是决定肤色的最主要的成分，它可分为两类：棕／黑色的优黑素和黄／红色的褐黑素。黑素具有一系列重要功能：1 形成皮肤颜色，参与人类种族区别或动物的保护色及性吸引；2 保护皮肤免受离子尤其是紫外线的辐射损害；3 清除有细胞毒性的自由基及氧化中间产物；4 与发育尤其是神经系统的发育过程有关。人类皮肤着色包括结构性和功能性两类：结构性(constitutive pigmentation)着色由遗传决定，不受外界环境的影响。功能性(facultative pigmentation)着色是环境作用下的黑素合成基础水平上的增加。 合成黑素是黑素细胞的最重要的功能及分化特征，黑素合成是一个多步骤的酶促生化反应，有着复杂而精确的调控。现已知至少有4个酪氨酸酶家族成员即酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)和stablin蛋白参与黑素合成的调控，它们彼此相互作用共同调控黑素细胞合成黑素的质和量。酪氨酸酶是黑素合成的关键酶，该酶催化黑素合成早期限速步骤，即底物酪氨酸羟化和多巴氧化。黑素合成的速率与酪氨酸酶的量及活性相关。TRP-1 南京医科大学博士学位论文与酪氨酸酶有着共同的两种催化活性，TRPJ的合成速率与黑素合成呈正相关。TRP上催化多巴色素转化为成5，6－H羟喇咪乙酸，可能在黑素合成的远端步骤起到关键作用。 黑素细胞位于表皮基底层，是一高度反应性细胞，能不断地根据外界环境的变化调节自身生物学行为。做为表皮多种细胞中的一部分，黑素细胞和表皮中的其他细胞发生相互作用：黑素细胞转运黑素小体至角质形成细胞，构成表皮黑素单元（EUM），角质形成细胞能够分泌多种因子和介质影响黑素细胞功能，由角质形成细胞、肥大细胞、郎格汉斯细胞合成和分泌的细胞因子、炎症贿、生长因子以及真皮基质成分调控着黑素细胞的增殖、黑素合成、粘附和移行过程，而黑素细胞亦能分泌一些介质成分影响炎症过程。 随着黑素细胞生物学及黑素生成调控机制的认识的不断深入，使对色素障碍性皮肤病的治疗获得一定进展，对黄褐斑、白疯风等色素增加或减少性皮肤病的治疗取得一定疗效；然而对大多数色素障碍性皮肤病仍缺乏有效手段，且已有的治疗方法疗效尚不满意。 本课题结合临床，从细胞、蛋白水平系统观察了皮质类固醇、维甲酸、积雪草戒三种药物对黑素细胞黑素合成的作用并探讨其作用机制，为该三种药物治疗色素障碍性皮肤病提供实验依据。 本课题研究包括以下三个部分。一、皮质类固醇对培养CloudmanS91黑素瘤细帆黑素合成的影响 观察皮质类固醇对体外培养的 Cloudman Sgl黑素瘤细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响，探讨外用皮质类固醇治疗白痰风的作用机 5 南京医科大学博士学位论文制。体卜培养勺CI。udm。nSgl黑素瘤细胞分别以系列浓度勺氢化考勺松、醋酸曲安奈德和倍他米松作用72h，测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖率。结果显示三种药物均能上调酪氨酸酶活性、提高黑素含量，且呈浓度依赖性。作用强度顺序为倍他米松＞醋酸曲安奈德＞氢化可的松。提示皮质类固醇在体外能刺激Cloudman Sgl黑素瘤细胞黑素合成，且与皮质类固醇的效价强度成正相关。外用皮质类固醇诱导白疯风复色可能与该作用有关。二、全反式维甲酸和阿达帕脓UVB ＠％的一lm仓黑素细胞黑素合成的影响 临床研究显示外用维甲酸可改善光老化等所致的色素沉着，然而其机制尚不完全清楚。利用体外培养的melan仓黑素细胞，我们观察了全反式维甲酸和阿达帕林对UVB诱导的melana黑素细胞黑素合成的影响。结果显示，H者可剂量依赖性抑制UVB诱导的细胞酪氨酸酶活性和黑素合成，使其回复到基础水平，但对基础黑素合成无明显影响，10”’mol／L的全反式维甲酸可抑制黑素细胞增殖，阿达帕林对细胞增殖无明显影响。全反式维甲酸和阿达帕林对细胞黑素合成的影响无明显差异。我们的结果提示维甲酸可直接作用于黑素细胞抑制其黑素合成，这可能是维甲酸脱色素作用的机制之一。三、积雪草毗贼酸酶活性的抑制作用袖CloudmanS91黑素瘤细胞黑素合成的影响 临床观察发现积雪草戒外用具有脱色素作用，可用于治疗黄褐斑等色素增多性皮肤病；本研究中观察了积雪草戒对蘑菇酪氨酸酶活性 6 南京医科大学博土学位论文的影响，结果显示积雪草戒能剂量依赖性抑制蘑菇酪氨酸酶活性，酶促动力学分析提示积雪草威为蘑菇酪氨酸酶混合型抑制剂。进一步研究发现，积雪草戒能抑制体外培养的 Cloudmansgl黑素瘤细胞酪氨酸酶活性和黑素合成，但对细胞增殖无明显影响。与氢眼相比，