前言　　前列腺癌在世界常见恶性肿瘤发病率中排名第三位，而在男性致死癌症中名列第六位，常见于欧美等国家，在中国前列腺癌的发病率较低，但近年来有明显上升趋势。前列腺癌的治疗方法多以去势和抗雄激素治疗为主，但大多发展成为去势抵抗的前列腺癌(CRPC)，难以治愈。目前，大量研究证实前列腺癌的发生发展与雄激素受体(AR)密切相关。　　雄激素受体(AR)做为转录因子属于类固醇激素受体超家族成员之一，与雄激素配体结合后被激活而发挥生物学作用。AR基本由5个结构域组成，1、氮末端结构域(NTD)2、DNA结合结构域(DBD)3、铰链区4、配体结合结构域(LBD)5、羧基端结构域(CTD)。　　AR与配体（如雄激素）结合后，与热休克蛋白HSP90解离，从细胞质转运至细胞核，形成AR二聚体，并结合到靶基因序列的ARE区，激活靶基因的转录。　　到目前为止，已发现大量的与AR相互作用的转录辅助调控因子，其中大部分作用在ARAF-2上，如p21介导的激酶PAK6，HBO1，FHL2，Tip60，小窝蛋白1等，p300和SRC-1可与ARAF-1和ARAF-2相互作用，而只有少量辅助调节因子仅与ARAF-1相互作用，但这类因子均具有独特的功能结构，例如，SRA，BRCA1，ART-21，CDK，ARA24，ARA160，CyclinE等。AR的辅助调控因子在癌症的发生发展过程中起重要作用，研究其在前列腺癌中的作用机制具有重要意义。　　例如，目前已被报道的AR辅助调控因子CyclinD1，存在两个亚基，CyclinD1a和CyclinD1b。CyclinD1a是AR的辅助抑制因子，可以直接结合并抑制AR，限制细胞的无限增殖。CyclinD1b的功能刚好与CyclinD1a相反，是AR的辅助激活因子，在前列腺癌中高度表达，促进AR的转录并参与AR下游靶基因的转录调控，促进AR阳性的前列腺癌细胞的增殖，但对AR阴性的前列腺癌细胞无任何作用。同时，CyclinD1作为细胞周期调节蛋白，其主要作用是促进细胞通过G1/S检查点，其功能的异常与肿瘤的发生发展密切相关。在AR依赖的前列腺癌细胞中，AR通过mTOR诱导CyclinD1的表达，促进CDK4/CyclinD1蛋白复合物的形成，而CyclinD1亦可对AR进行反馈调节，CyclinD1的积累通过干扰组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)的招募从而减弱AR的活性。因此，CyclinD1在前列腺癌的发生发展过程中起重要作用。　　我们过去利用酵母双杂交技术以ARAF-1为诱饵，筛选出AR的一种辅助激活因子，命名为ANT-1（雄激素受体氮末端结构域转录激活蛋白-1），即hARAP5。hARAP5可结合于ARAF-1区域，增强AR和GR介导的转录调控作用，但未见对ERa介导的转录调控起作用。此外，hARAP5也是一种mRNA前体的剪切因子，在剪切体的形成过程中起着重要作用。目前，已有的研究报道hARAP5含有941个氨基酸，分子量为102kD，含有21个外显子，定位于染色体22q13.33。hARAP5包含了19个TPR重复，2个LxxLL基序和1个亮氨酸拉链。hARAP5的主要功能结构域为TPR重复，TPR重复调节复合物中蛋白质-蛋白质之间的相互作用。但是，关于hARAP5在前列腺癌中的作用机制的研究至今未见任何报道。　　本课题旨在研究hARAP5作为AR的辅助激活因子在前列腺癌中的作用机制，为前列腺癌的早期诊断和治疗提供实验依据和新靶点。　　实材料与方法　　一、实验材料　　1、质粒提取试剂盒。　　2、免疫组织化学实验试剂盒。　　3、体外转录试剂盒。　　4、逆转录及SYBRPremixExTaq试剂盒。　　5、PCR扩增试剂。　　二、实验方法　　1、WesternBlot分析hARAP5在前列腺癌细胞系中的表达。　　2、免疫组织化学实验验证hARAP5在前列腺癌中高度表达。　　3、RNA干扰敲除hARAP5。　　4、染色质免疫沉淀技术(ChIP)验证hARAP5结合与AR的启动子。　　5、RealTimePCR研究hARAP5的敲除对AR下游靶基因的影响。　　6、RealTimePCR分析hARAP5的敲除对CyclinD1的影响。　　7、用流式细胞技术研究hARAP5对细胞周期的影响。　　8、克隆实验和绘制生长曲线验证hARAP5对前列腺癌细胞增殖的影响。　　9、Transwell实验验证hARAP5促进前列腺癌细胞迁移。　　结果　　hARAP5在前列腺癌中高度表达并促进前列腺癌的增殖及转移。hARAP5参与AR介导的转录调控，与AR共同招募于AR的启动子ARE区，促进AR下游靶基因的转录，同时促进CyclinD1的表达。　　结论　　1、hARAP5在前列腺癌中高表达。　　2、hARAP5招募于AR的启动子，促进AR下游靶基因的转录。　　3、hARAP5在转录水平上促进了AR下游因子CyclinD1的表达。　　4、hARAP5促进前列腺癌的增殖及转移。