第一部分自噬相关基因5在卵巢肿瘤病人中的表达及对卵巢癌细胞系SKOV3增殖影响的意义研究　　目的：检测卵巢肿瘤中自噬相关基因5（Atg5）的表达情况，公共数据库分析 Atg5在mRNA表达水平的与患者预后的相关性。研究人卵巢癌细胞系SKOV3中Atg5下调对细胞增殖的影响。　　方法：收集各种类型卵巢肿瘤病人卵巢肿瘤标本共30例，切取标本石蜡包埋并对其进行Atg5抗体的免疫组织化学染色，检测Atg5在不同卵巢肿瘤病人中的表达情况。应用公共数据库Kaplan-Meier plots对多组卵巢癌病人mRNA表达谱分析，预测Atg5的表达水平对患者预后的影响。SKOV3细胞分为两组，阴性对照组(转染阴性对照siRNA)和实验组(转染Atg5 siRNA)。通过蛋白印记法检测、CCK-8法及克隆形成实验检测细胞转染siRNA后Atg5的表达及增殖情况。　　结果：免疫组织化学检测卵巢肿瘤组织Atg5蛋白表达情况，卵巢癌组阳性率（75％）较交界性卵巢肿瘤（40%）及良性卵巢肿瘤（20%）表达水平高，且卵巢癌与良性卵巢肿瘤组差异有统计学意义。公共数据库Kaplan-Meier plots表达谱芯片分析Atg5 mRNA水平表达水平对患者预后的影响，结果显示高表达Atg5组较低表达组预后差，差异有统计学差异（P=3.1e-05，HR=1.37（1.18-1.58））。对人类卵巢癌细胞系SKOV3进行反义siRNA干扰，选取有封闭效应的细胞采用CCK8法分别在不同时间点检测细胞的增殖能力，阴性对照组和转染Atg5 siRNA组（实验组）A450值在24、48、72小时对照组及实验组A450值分别为1.179±0.036、1.454±0.040、1.828±0.059；0.640±0.039、1.032±0.0541.146±0.040，实验组较阴性对照组明显降低，差异有统计学意义。　　结论：免疫组织化学法检测 Atg5在卵巢癌中表达与良性肿瘤及交界性卵巢肿瘤相比明显升高，对公共数据库mRNA表达谱芯片的分析显示，Atg5高表达可能与卵巢癌的不良预后有关，反义干扰siRNA显著下调了Atg5蛋白水平表达的SKOV3细胞，其增殖能力受到明显抑制。　　第二部分TSA在卵巢癌细胞系SKOV3中通过诱导自噬减少细胞凋亡的机制研究　　目的：通过观察研究TSA对卵巢癌细胞生长和凋亡、自噬及产生ROS的情况，探讨其作用机制。　　方法：应用western blot法检测TSA作用后卵巢癌细胞系SKOV3中PARP，Atg5，Bcl-2，LC3B等蛋白表达水平的变化；采用流式细胞术检测TSA作用于卵巢癌细胞系SKOV3中引起的细胞凋亡,细胞ROS产生情况及变化；观察细胞荧光的方法检测TSA作用于过表达LC3-GFP的SKOV3细胞系中LC3-GEP荧光点的产生、分布和聚集情况。　　结果： GFP-LC3的SKOV3细胞荧光强度随着TSA加药浓度的增加而增加，自噬细胞的比例逐渐增加。Western blot检测自噬相关蛋白Atg5、LC3B的表达水平随时间的增加，提示自噬水平增加。流式细胞术检测经TSA处理被MitoSOX-Red标记的细胞，荧光强度增加，提示TSA可以诱导细胞ROS的产生。当TSA与自噬抑制剂氯喹（CQ）联用时，细胞较单加TSA时细胞GFP-LC3荧光点显著减少，自噬细胞比例明显降低。Atg5表达水平下降，而凋亡相关蛋白表达水平增高，同时流失细胞数测得凋亡率增加，提示自噬水平降低同时凋亡水平增加，差异有统计学意义。而当 TSA与抗氧化剂 N-乙酰半胱氨酸(NAC)联用时，流式细胞术检测 ROS水平被显著抑制，此时细胞自噬水平较单加TSA组显著被制而凋亡率增加，差异有统计学意义。　　结论： TSA可以诱导细胞内ROS的产生及自噬和凋亡水平的增加。TSA处理的细胞中，抑制细胞内自噬水平时凋亡水平随之增加，当抑制细胞内ROS的产生时，细胞内自噬水平降低同时凋亡水平增加。提示TSA诱导产生的ROS可以使细胞内保护性自噬增加，从而使细胞的凋亡率降低，抑制ROS的产生可以降低自噬水平，使细胞凋亡率增加。TSA作为一种新型去乙酰化抑制剂，在抗肿瘤方面有显著作用，但可能引起肿瘤细胞的耐药，需要进一步研究它在肿瘤细胞中的作用机制来优化它的抗肿瘤效应。