叶绿素是植物进行光合作用的物质基础，通过提高叶绿素含量来提高光合作用速率可以提高作物产量，从而实现作物超高产目标。本实验室得到一个水稻高叶绿素自然突变体材料，经遗传分析，高叶绿素性状由显性单基因控制。到目前为止，在国内外还没有相关水稻高叶绿素突变体性状的报道。因而对控制该性状的高叶绿素基因进行克隆和功能研究，对水稻高叶绿素基因分子机理的阐述具有重要理论价值；同时对高叶绿素基因的功能研究，对发现潜在的功能，实现水稻的优质高产具有重大的现实意义。本论文以OsDET1为候选基因，对该基因的表达量进行研究分析，构建了一系列表达载体并转化烟草和水稻以实现对OsDET1基因的功能验证。以下是论文的主要结论：　　（1）OsDET1基因的表达量分析　　利用荧光实时定量RT-PCR（real-timequantitiveRT-PCR），以水稻野生型（珍汕97B）为对照，对OsDET1基因在不同组织器官进行相对定量分析，发现OsDET1在根、叶鞘、叶片中，其野生型和突变体的表达水平不一致，在叶片和叶鞘中，与野生型相比，OsDET1基因在突变体中的表达量增加了大约一倍，而在根中，与野生型相比，其OsDET1在突变体的表达量并没有差别。　　（2）OsDET1在水稻及烟草中的超表达研究　　在实验室前期构建的两个表达载体pCAMBIA1301-OsDET1、pCUPHN-OsDET1的基础上，将这两个表达载体分别转化对烟草和水稻，经过PCR检测，最终得到一批转基因阳性水稻和烟草植株。　　利用半定量PCR（semi-quantitativePCR）对OsDET1基因进行表达量分析，分析结果发现：与野生型相比，转基因水稻植株叶中OsDET1基因的表达量明显提高，提高了2.7倍；测定转基因水稻叶片叶绿素含量，结果证明：与野生型相比，转基因水稻植株的叶绿素a、b含量分别提高了60％和59％。　　（3）OsDET1基因干扰载体的构建及对水稻的遗传转化　　本章构建了两个干扰载体：一个全长干扰载体和部分干扰载体。将干扰载体转化水稻愈伤，通过PCR和GUS检测，最终证明干扰载体成功转入水稻愈伤，对转基因植株进行OsDET1基因的表达量分析，发现与野生型相比，干扰植株的OsDET1基因的表达量并没有差别。　　（4）OsDET1基因的亚细胞定位　　通过农杆菌介导法将OsDET1-GFP重组质粒导入洋葱表皮细胞进行瞬时表达，在荧光显微镜下观察，亚细胞定位结果表明OsDET1基因所表达的蛋白位于细胞核内。　　（5）OsDET1基因的启动子序列分析　　通过生物信息学软件对野生型OsDET1的启动子进行序列分析，对启动子重要顺式作用元件的预测可以得出，该启动子除了含有最基本的核心元件外，在启动子的保守区域含有大量与光反应相关的元件，说明OsDET1基因是与光调节诱导有关。除此之外，还含有几个未知功能的顺式作用元件，说明该启动子序列含有潜在的研究价值。