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根据目前国内外龋病研究的发展动态,研究变形链球菌致龋因子葡萄糖基转移酶和表面抗原Ⅰ/Ⅱ的结构基因。本研究包括下面两部分。 一、葡萄糖基转移酶基因(gtfB)的扩增、克隆、部分序列分析及其生物学意义 按Shiroza等(1987)测定的变链菌GS—5株(血清C型)gtfB基因核苷酸序列,设计并合成了2对寡核苷酸引物。第Ⅰ对:引物1,5′—TCTAATGGTGAAAAGCTTCAAAAT—3′(序列号1036~1059);引物2:5′—TGTGACGATATCTTTATTTACAGTGTC—3′(序列号1321~1347)。第Ⅱ对:引物1,5′—TTC-CAAGCTTTCGCCACT—3′(序列号3214~3231);引物2,5′—CT-TAACAGAAGGATCCATCGG—3′(序列号3724~3744)。采用PCR方法分别对13株变链标准株、23株口腔常居菌进行扩增,结果变链标准株除BI(g)未扩增出312bp DNA片段外,其余均扩增出312bp、531bp两种DNA片段;同时2对引物与口腔常居菌存在交叉反应,部分口腔常居菌也扩增出312bp、531bpDNA片段。 分离纯化变链标准株NG8(血清C型)扩增产物,采用随机引物标记法,以α—32PdCTP(1.11×1014Bq)标记2种DNA探针(长度312bp、531bp),以此探针与13株变链标准株扩增的相应大小的DNA片段进行Southern杂交,结果均出现强杂交信号。 将变链菌NG8株扩增的531bpDNA片段,通过质粒载体pBlue-