亚抑菌浓度阿奇霉素联合左氧氟沙星对腹膜透析管大肠杆菌生物膜干预研究

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第一部分体外腹膜透析液—腹膜透析管系统大肠菌生物膜静置模型的建立目的:腹膜透析液—腹膜透析管系统建立大肠杆菌(Escherichia coil, E.coli)生物膜(Bacterial biofilms, BF)体外静置模型。方法:(1)采用刚果红平板法初步判断临床分离E. coli能否形成BF;(2)以腹膜透析管为载体,无菌腹膜透析液为培养液,于24孔细胞培养板内建立E.coli BF体外静置模型。分别以银染法、扫描电子显微镜(Scanning electron microscopy,SEM)观察表面BF形态,鉴定临床分离菌株BF。结果:(1)我院临床分离E.coli (编号:0407611754525610)菌落及周围刚果红琼脂平板变黑;(2)经培养24h,腹膜透析管表面可见覆盖一层淡白色粘液样物质,银染载体表面可见团块状、絮状黑色物质。SEM观察可见腹膜透析管表面呈团簇状、珊瑚状聚集物,细菌相互之间可见丝状或大片块状粘连的膜样物质。结论:(1)我院临床分离E.coli可形成BF;(2)以腹膜透析管为载体,腹膜透析液为培养液,培养24h可建立E.coli BF体外静置模型。第二部分阿奇霉素联合左氧氟沙星对大肠杆菌生物膜干预研究目的:研究阿奇霉素(Azithromycin, AZM)联合左氧氟沙星(Levofloxacin, LFX)对腹膜透析管表面E.coli BF的影响。方法:(1)分别测定AZM、LFX对临床分离E.coli最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration, MIC)及LFX最低杀菌浓度(Minimum bactericidal concentration, MBC);(2)建模24h后对各组分别进行处理。A组:空白对照组;B组:1/8MIC AZM组;C组:1MBC LFX组;D组:1/8MIC AZM+IMBC LFX组。经药物作用12h,各组分别以银染法、扫描电子显微镜观察腹膜透析管表面BF结构,以结晶紫染色法行载体表面BF半定量计数,连续稀释法行BF内活菌计数。结果:(1)AZM对E.coli的MIC是128μg/ml; LFX对E. coli的MIC是2μg/ml, MBC是32μg/ml;(2)连续稀释法行BF内活菌计数结果提示:1/8MIC AZM组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05);1MBC LFX组与空白对照组比较数量减少,差异有统计学意义(P<0.01);1/8MIC AZM+IMBC LFX组与1MBC LFX组比较数量减少,差异有统计学意义(P<0.05);(3)结晶紫染色法行载体表面BF半定量计数亦发现1/8MIC AZM+IMBC LFX组与1MBCLFX组比较数量减少,差异有统计学意义(P<0.01);(4)扫描电子显微镜观察可见1/8MIC AZM+IMBC LFX组表面E.coli BF结构体积较空白对照组明显减少;银染法可得到类似结果。结论:(1)亚抑菌浓度AZM对E.coli BF内菌无明显抗菌效应;(2)单独使用LFX对PD管表面E.coli BF内菌具有抗菌效应;(3)亚抑菌浓度AZM可增强LFX对PD管E.coli BF内菌的抗菌效应。
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