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第一部分体外腹膜透析液—腹膜透析管系统大肠菌生物膜静置模型的建立目的:腹膜透析液—腹膜透析管系统建立大肠杆菌(Escherichia coil, E.coli)生物膜(Bacterial biofilms, BF)体外静置模型。方法:(1)采用刚果红平板法初步判断临床分离E. coli能否形成BF;(2)以腹膜透析管为载体,无菌腹膜透析液为培养液,于24孔细胞培养板内建立E.coli BF体外静置模型。分别以银染法、扫描电子显微镜(Scanning electron microscopy,SEM)观察表面BF形态,鉴定临床分离菌株BF。结果:(1)我院临床分离E.coli (编号:0407611754525610)菌落及周围刚果红琼脂平板变黑;(2)经培养24h,腹膜透析管表面可见覆盖一层淡白色粘液样物质,银染载体表面可见团块状、絮状黑色物质。SEM观察可见腹膜透析管表面呈团簇状、珊瑚状聚集物,细菌相互之间可见丝状或大片块状粘连的膜样物质。结论:(1)我院临床分离E.coli可形成BF;(2)以腹膜透析管为载体,腹膜透析液为培养液,培养24h可建立E.coli BF体外静置模型。第二部分阿奇霉素联合左氧氟沙星对大肠杆菌生物膜干预研究目的:研究阿奇霉素(Azithromycin, AZM)联合左氧氟沙星(Levofloxacin, LFX)对腹膜透析管表面E.coli BF的影响。方法:(1)分别测定AZM、LFX对临床分离E.coli最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration, MIC)及LFX最低杀菌浓度(Minimum bactericidal concentration, MBC);(2)建模24h后对各组分别进行处理。A组:空白对照组;B组:1/8MIC AZM组;C组:1MBC LFX组;D组:1/8MIC AZM+IMBC LFX组。经药物作用12h,各组分别以银染法、扫描电子显微镜观察腹膜透析管表面BF结构,以结晶紫染色法行载体表面BF半定量计数,连续稀释法行BF内活菌计数。结果:(1)AZM对E.coli的MIC是128μg/ml; LFX对E. coli的MIC是2μg/ml, MBC是32μg/ml;(2)连续稀释法行BF内活菌计数结果提示:1/8MIC AZM组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05);1MBC LFX组与空白对照组比较数量减少,差异有统计学意义(P<0.01);1/8MIC AZM+IMBC LFX组与1MBC LFX组比较数量减少,差异有统计学意义(P<0.05);(3)结晶紫染色法行载体表面BF半定量计数亦发现1/8MIC AZM+IMBC LFX组与1MBCLFX组比较数量减少,差异有统计学意义(P<0.01);(4)扫描电子显微镜观察可见1/8MIC AZM+IMBC LFX组表面E.coli BF结构体积较空白对照组明显减少;银染法可得到类似结果。结论:(1)亚抑菌浓度AZM对E.coli BF内菌无明显抗菌效应;(2)单独使用LFX对PD管表面E.coli BF内菌具有抗菌效应;(3)亚抑菌浓度AZM可增强LFX对PD管E.coli BF内菌的抗菌效应。