第一部分IL-35促进IgG4相关疾病中Th9细胞介导的IgG4类别转换背景与目的:IgG4相关疾病(IgG4-RD)是累及全身多种脏器的自身免疫性疾病,以血清IgG4水平显著升高、肝脏/胰腺组织中IgG4阳性浆细胞大量浸润、闭塞性静脉炎和席纹状纤维化为主要特征。但是,异常免疫应答在IgG4-RD发生发展中所起的作用尚未完全明确。IgG4相关硬化性胆管炎可以并发或不并发自身免疫性胰腺炎,导致顽固性黄疸和胆道感染,甚至进展为肝硬化和肝衰竭。这项研究的目的是明确IgG4相关疾病中特异性表达的炎症因子,并阐明分泌IL-35的浆细胞与Th9细胞之间的相互作用促进IgG4相关疾病中免疫球蛋白类别转换的机制。方法:在IgG4相关疾病患者的血浆样本中检测24种促炎症细胞因子和13种趋化因子的表达水平。实验结果表明,与疾病对照和健康对照组相比,IgG4相关疾病患者血浆IL-35表达水平显著升高。采用免疫组化、免疫荧光方法分别检测肝脏和胰腺组织中IL-35两个亚基EBI3和IL-12p35表达水平。随后我们通过体外诱导实验和流式细胞术评估了IL-35在Th9细胞分化中的作用。为了进一步阐明Th9细胞在IgG4相关疾病中的作用,我们通过流式细胞术、免疫组化和免疫荧光检测了IgG4-相关疾病患者外周血和病变组织中Th9细胞的数量,并通过体外诱导实验检测IL-9在浆细胞分化和免疫球蛋白抗体类别转换过程中的作用。结果:与疾病对照和健康对照组相比,IgG4相关疾病患者血浆IL-35表达水平显著升高,病变组织中EBI3和IL-12p35阳性细胞数量显著升高。EBI3、IL-12p35分别与B细胞标志物CD19和CD38存在共定位,表明IgG4相关疾病患者病变组织中B细胞可以分泌IL-35。有趣的是,体外诱导实验表明IL-35通过激活IRF4促进了幼稚的CD4阳性T细胞向Th9细胞分化。IgG4相关疾病患者外周血和病变组织中Th9细胞显著升高,由Th9细胞分泌的IL-9促进了浆细胞的分化以及IgG1和IgG4的产生,且主要促进了浆细胞分泌IgG4,使IgG1/IgG4比值显著降低。结论:IgG4相关疾病患者IL-35显著升高,并且在Th9细胞分化中发挥重要作用,从而进一步促进了IL-9介导的浆细胞分化和IgG4型免疫球蛋白类别转换。第二部分P4HA2在自身免疫性肝病中调控胆管反应并促进胆汁淤积性肝纤维化的机制研究背景与目的:原发性胆汁性胆管炎(PBC)和原发性硬化性胆管炎(PSC),是自身免疫介导的慢性胆汁淤积性肝病,以非化脓性胆管损伤为主要特征,可进展为胆汁淤积性肝纤维化、肝硬化甚至肝衰竭。慢性胆汁淤积性肝损伤时,胆管反应是导致胆汁淤积性肝纤维化的关键事件。脯氨酰4-羟化酶A2(P4HA2)表达于胆管反应细胞,这项研究的目的是探究P4HA2调控胆管反应促进胆汁淤积性肝纤维化的机制。方法:采用免疫组化、免疫荧光方法检测肝组织中P4HA2表达情况。构建P4HA2~(-/-)小鼠,采用H