目的：建立头孢呋辛酯原料药有关物质的分析方法,对头孢呋辛酯原料药中存在的未知杂质进行化学结构确认。为其原料及制剂有关物质检查方法的建立及改进提供参考,为其原料及制剂在生产过程中的质量控制提供依据。方法：(1)运用Design-Expert7.0软件对有关物质液相分析的色谱参数进行优化方案设计和实验结果分析；(2)对分析方法进行验证,并对样品进行测定,统计含量较大杂质的量；(3)采用LC-MS联用技术结合p-内酰胺类抗生素降解机制对未知杂质进行结构分析,化学合成未知杂质以验证其结构；(4)采用胚胎暴露于测试液的发育实验及显微注射导入测试液的发育实验考察较大杂质的斑马鱼胚胎毒性。结果：(1)得出的最佳高效液相色谱法条件：检测波长278nm;色谱柱：C18；流动相：0.1mol/L的乙酸铵(pH：4.5)-甲醇(70：30)；柱温：35℃；(2)通过对分析方法的验证,表明该方法简便、灵敏、专属性强。经样品测定,未知杂质占杂质总量的比例约为48.87%；(3)确定了8个未知杂质的化学结构,未知杂质1为头孢呋辛酸；杂质2、3、4为头孢呋辛酸甲酯；杂质5、6为头孢呋辛酯亚砜；杂质10、11可能为头孢呋辛酯p-内酰胺环的开环产物。以头孢呋辛酸为原料合成杂质4,核磁验证其结构为头孢呋辛酸甲酯△3-异构体；以头孢呋辛酯为原料合成头孢呋辛酯亚砜。(4)头孢呋辛酸甲酯△3-异构体的斑马鱼胚胎毒性较小。结论：本课题建立的方法能较好的控制头孢呋辛酯中有关物质的含量,鉴定了头孢呋辛酯原料药中的多个未知杂质,进而对药品杂质控制和工艺优化提供参数。