据统计,2010年辽宁省仿刺参养殖总产值已占全国1/3以上,成为辽宁省的经济支柱,也是全国的阳光产业。然而在仿刺参养殖过程中大多存在病菌污染现象,了解仿刺参微生物组成不但可以为仿刺参致病菌的研究提供理论基础还可以发掘新的微生物资源及代谢产物。本文摸索了构建仿刺参体表细菌16SrDNA克隆文库的条件,用细菌基因组试剂盒提取仿刺参体表细菌总DNA,用通用引物27f、1492r对基因组DNA进行扩增,条件;95℃ 5 min;95℃ 40s,55 ℃ 1min,72 ℃ 2min,30个循环;72 ℃ 10min下扩增出的16SrDNA片段较理想。将扩增产物经试剂盒回收纯化后得到DNA浓度为100μg/mL。以1:5的摩尔比与T载体pMD19-TVector连接,转入到E.coli DH5α感受态细胞中进行表达,获得白斑225个。随机挑取72个白色单菌落进行验证,其中成功转化的有34个,阳性克隆率为47%。阳性克隆经过份Hinf Ⅰ和HaeⅢ限制性内切酶分析后得到7个可操作分类单元(OTUs),克隆文库库容覆盖率Coverage C值为92.5%,经过对比得到4株潜在未可培养菌株。目前预防和治疗仿刺参细菌性疾病通常采用添加抗生素的方法,这些药物虽然可以抑制或杀死病原菌却破坏了养殖环境中正常菌群平衡,从生物防治的角度出发,利用拮抗菌株抑制病原菌的生长,不仅能降低养殖成本,也提高了仿刺参产品的安全和健康性。从实验室保存的仿刺参相关微生物中筛选对仿刺参3种致病菌及2株弧菌有拮抗作用的菌株,纸片法筛选出对迟钝弧菌、副溶血弧菌、灿烂弧菌、ZZ-14(Vibrio sp)及CT-7(Vibrio cyclitrophicus)有拮抗作用的菌株数量分别为:11株、7株、8株、14株和3株。划线法筛选出对迟钝弧菌、灿烂弧菌、ZZ-14(Vibriosp.)及CT-7(Vibriocyclitrophicus)有拮抗作用的菌株数量分别为:6株、20株、5株和4株。根据拮抗活性的强弱分别选择对迟钝弧菌和灿烂弧菌有拮抗作用的菌株11株和7株进行拮抗机理研究,得出对迟钝弧菌有拮抗作用的菌株中:1株菌通过细菌的营养物质和生存空间竞争方式抑菌,4株菌产生抑菌物质抑菌,1株菌通过以上两种机制协同抑菌。抑菌物质大多是极性较大分子。其中有一株拮抗菌产生β-1,3-葡聚糖酶。对灿烂弧菌有拮抗作用的菌株中:7株菌均通过营养物质与生存空间竞争及产生抑菌物质两种方式协同抑菌,抑菌物质都是极性较大的分子。7株拮抗菌均不产生几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶和纤维素酶。