Ⅰ群禽腺病毒湖北株的分离鉴定及致病性研究

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“心包积水-肝炎综合征”(Hydropericardium hepatitis syndrome, HHS)是由血清4型Ⅰ群禽腺病毒(Fowl Adenovirus serotbe4, FAV 4)引起的一种新型家禽疾病。典型症状是3-5周龄肉鸡、蛋鸡突然死亡,主要特征是心包蓄积黄色水样或胶冻样物、肝脏肿大、质脆色淡。1963年Helmboldt等在美国的肉用仔鸡中首次发现该病,之后墨西哥、加拿大、日本、澳大利亚等许多国家均报道有本病的发生,说明腺病毒感染之广泛性。1976年,我国台湾报道了该病,随后在辽宁、吉林、湖南、江苏和河南等省相继也发现该病的存在。1987年在土耳其的安卡拉报道本病,1989年墨西哥报道了该病的发生,随后在伊拉克、印度、厄瓜多尔、秘鲁、智利、俄罗斯等地相继暴发了该病。该病在国内已经成为一种严重危害养禽业发展的传染病,带来了严重的经济损失。国内目前分离到血清1型、血清2型和血清8型的Ⅰ群禽腺病毒,为了解Ⅰ群禽腺病毒在湖北鄂西地区的血清型分布,感染状况及致病性。本试验从湖北省鄂西不同地区采集疑似心包积水-肝炎综合征发病鸡群的肝脏,开展了病毒分离。观察解剖时的病理变化并保存病料做病理组织切片。将无菌采集的肝脏病料研磨后接种于SPF鸡胚然后盲传3代,收集第三代尿囊液提取DNA,应用PCR方法对分离毒株六邻体(hexon)基因进行扩增:根据设计的FAV-4型Ⅰ群禽腺病毒引物鉴别分离毒株的血清型。结果在发病的蛋鸡中分离到3株Ⅰ群禽腺病毒。测序结果表明分离的3株病毒基因同源率为100%,是属于同一株毒株。本研究通过对分离毒株的hexon基因进行序列分析,病毒分离株与FAV4相似性为99.8%,与中国农业大学分离株相似性为99.3%,与其他血清型的相似性为69.6%-98.4%。与Ⅱ群禽腺病毒的鸡出血性肠炎病毒和Ⅲ群禽腺病毒的减蛋综合征病毒的相似性为43.1-78.6%。同源性比较结果与FAV-4引物扩增结果一致。分离株氨基酸与报道的来源于湖北武汉的毒株的同源性最高,但是分离株hexon基因第3、368、786个氨基酸发生了改变。采用皮下接种途径将分离到的毒株接种至40日龄的SPF鸡,同时设对照组,逐日观察鸡只的发病情况及症状;攻毒组鸡只出现发病死亡立即解剖观察,采集肝脏等器官固定、切片、HE染色。结果发现,Ⅰ群禽腺病毒接种后,试验组鸡相继出现精神沉郁,食欲减退,翅膀下垂,屈腿蹲立,蜷缩一角,羽毛蓬乱,个别出现拉黄绿色粪便。整个试验阶段,死亡率达到60%。发病鸡解剖病变:可见心包积液,蓄积大量黄色液体,心脏黄染。肝出现明显的出血斑和出血点,部分出现土黄色肾脏肿大,有尿酸盐沉积,肌胃肿大,但无出血点。试验组未死亡鸡只解剖心脏未出现心包积液,肝脏个别出现散在出血点。对照组鸡只心脏和肝脏正常,未发现病变。应用PCR方法检测验证,试验组死亡鸡只和试验组未死亡鸡只均出现目的条带,而对照组没有条带产生,说明试验组死亡鸡只感染禽腺病毒。试验组未死亡鸡只呈隐性感染,对照组鸡只正常。
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