[目的]　　 eIF4E是新近发现的原癌基因，在过表达时通过增强众多癌基因的翻译表达促进多种肿瘤的增殖和转移。HPVE6/E7是宫颈癌的源头癌基因。eIF4E在宫颈癌中表达显著增高，但其机制不清楚。E6/E7对eIF4E的表达影响至今未见研究报道。本实验研究E6/E7对eIF4E转录表达的调控作用，以及这种作用对宫颈癌细胞增殖、细胞周期、凋亡及迁移的影响，阐明eIF4E在宫颈癌中过表达及E6/E7致癌的新机制。为进一步研究宫颈癌诊断和治疗的新靶点提供实验依据。　　 [方法]　　 1.以宫颈慢性炎为对照，CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ、宫颈浸润癌为宫颈肿瘤的演进模型，病变程度依次由轻到重。　　 2.病例：宫颈慢性炎21例、CINⅠ25例、宫颈上皮内瘤变CINⅡ-Ⅲ31例、宫颈鳞癌(SCC)21例。　　 3.免疫组织化学方法检测上述标本的eIF4E，c-myc，MMP9的表达情况，分别分析eIF4E表达与c-myc，MMP9表达的相关性。　　 4.用脂质体法将HPV18E6/E7的shRNA质粒转染人宫颈癌Hela细胞(HPV18+，eIF4E+)并评价转染效率。　　 5.使用3对靶向HPV18E6/E7基因的shRNA质粒转染Hela细胞，转染48小时后用Real-time PCR和RT-PCR检测E6/E7 mRNA水平，筛选高效的shRNA质粒。　　 6.以干扰效率最高的E6/E7shRNA质粒转染Hela细胞，用Real-time PCR和RT-PCR检测eIF4E的mRNA水平，免疫细胞化学检测eIF4E蛋白表达水平。　　 7.用E6/E7shRNA质粒转染Hela细胞，采用CCK-8法，流式细胞术(FCM)及Transwell板等分别检测Hela细胞增殖、细胞周期、凋亡以及迁移能力的改变。　　 8.用HPV16E6/E7表达质粒转染人宫颈癌C-33A细胞(HPV-，eIF4E+)，转染20小时后通过RT-PCR检测E6/E7和eIF4E mRNA的表达情况，并采用CCK-8法及Transwell板等分别检测C-33A细胞增殖活性以及迁移能力的改变。　　 9.实验资料统计运用统计学软件spss17.0分别进行卡方检验、Sperman相关性分析以及多组间差异性的单因素方差分析(one-wayANOVA)等统计学处理。　　 [结果]　　 1.以宫颈慢性炎，CINⅠ，CINⅡ-Ⅲ，浸润癌为次序，eIF4E的阳性表达率分别是9.5％(2/21)，40％(10/25)，61.3％(19/31)，90.5％(19/21)；c-myc的阳性表达率分别是14_3％(3/21)，52％(13/25)，71％(22/31)，100％(21/21)；MMP9的阳性表达率分别是33.3％(7/21)，64％(16/25)，80.6％(25/31)，100％(21/21)。　　 2.eIF4E与c-myc的表达相关系数是0.555，eIF4E与MMP9的表达相关系数是0.450，c-myc与MMP9的表达相关系数是0.636。　　 3.HPV18 E6/E7 shRNA转染Hela细胞转染效率在40％以上，符合本实验需要。　　 4.E6/E7 shRNA抑制效率：E6shRNA1为36％；E6shRNA2为45％；E6shRNA3为81％；E7shRNA1为32％；E7shRNA2为85％；E7shRNA3为34％；以E6shRNA3和E7shRNA2的抑制效率最高，满足本实验要求。　　 5.E6shRNA3在转染48小时后对eIF4E mRNA的抑制率为76％，E7shRNA2在转染48小时后对eIF4E mRNA的抑制率为73％；eIF4E蛋白表达水平随其mRNA水平改变而改变。　　 6.E6/E7 shRNA对Hela细胞的增殖活性在48h的抑制效果最明显，增殖抑制率分别为21.6％和17.3％；G0/G1期细胞比例显著增高，S期细胞比例显著降低，细胞凋亡率明显增加以及细胞迁移能力减弱。　　 7.HPV16 E6/E7表达质粒转染C-33A细胞，HPV16 E6/E7显著表达，同时eIF4E的mRNA转录表达水平显著提高。　　 [结论]　　 1.随着宫颈肿瘤恶性程度的增加，eIF4E、c-myc、MMP9的表达水平显著升高，表明eIF4E、c-myc、MMP9的表达与宫颈癌的发生发展密切相关。　　 2.在宫颈肿瘤中，eIF4E的表达与c-myc和MMP9表达呈正相关。结合以往文献报道，在其他癌细胞中eIF4E直接增强c-myc和MMP9的翻译表达，以此推测eIF4E通过增强c-myc和MMP9的翻译表达来促进宫颈鳞癌的发生发展。　　 3.HPV18 E6/E7 shRNA可有效沉默Hela细胞的E6/E7基因。　　 4.HPV E6或者E7均可以增强eIF4E的转录表达，依据是HPV18 E6/E7沉默显著抑制eIF4EmRNA和蛋白表达，而HPV16 E6/E7基因转染表达可增强eIF4E的转录表达。据文献检索，这是首次发现HPV E6/E7调控eIF4E的转录表达。　　 5.HPV E6/E7增强eIF4E基因的表达促进宫颈癌细胞的增殖、细胞周期进程和迁移，抑制凋亡。