大肠杆菌是一类常见的人畜共患病病原菌。临床上分为肠内致病菌、肠外致病菌和共生菌三类。对于禽类而言,大肠杆菌可作为肠道内正常菌群存在,或存在于宿主粘膜表面。只有那些具有特定毒力特征且引起发病的菌株被认定为禽致病性大肠杆菌,它是家禽最常见的病原菌之一,大多引起肠道外感染,主要表现为呼吸道或全身性感染,引起一系列疾病最终引起死亡,造成严重的经济损失,同时大肠杆菌病还受环境及机体因素诱发产生。目前该病已跻身为危害养禽业的细菌性疾病之首。为了解鸡大肠杆菌的流行病学特点,本研究对武汉周边8个地区鸡大肠杆菌进行分离鉴定,通过血清分型、耐药表型、群系鉴定及毒力因子分析确定优势血清型的强毒菌株ACN003,并缺失其毒力基因iucB。本研究主要内容如下：一.鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性等特性的研究1.自武汉周边鸡场送检的发病鸡中分离得到45株细菌。经糖发酵试验、IMVIC试验等生化试验及培养特性观察,证实获得的45株细菌为大肠杆菌。生化试验表明：45株菌均能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蜜二糖、山梨醇、甘露醇,不分解肌醇、纤维二糖、阿拉伯醇,部分菌株可分解卫矛醇、山梨糖、棉子糖、鼠李糖、蔗糖等。所有分得的菌株均不能利用枸橼酸盐,吲哚试验阳性,MR试验阳性,VP试验阴性,即IMViC为“++--”。2.分离菌株毒力基因的扩增鉴定：选择5个致病菌株的保守基因(papC, tsh, iucD, iss, irp2)进行PCR扩增,结果表明45株菌中iss检出率高达82.22%, iucD的检出率为68.89%, irp2的检出率为28.89%,tsh的检出率为26.67%, papC的检出率为4.44%。3.用大肠杆菌单因子血清进行血清型鉴定,分得菌株中有21株鉴定出了血清型,占分离菌株总数的46.67%。在可分型的菌株中鉴定出8种不同的血清群,包括078、02、04、O11、020、018、038、0128。其中078为本次分得菌株的优势血清型,共有7株,占测出血清型菌株总数的33.3%。4.PCR扩增chuA、yjaA、TspE4C2,判定分离菌株所属群系。分离菌株以B1群居多,共有36株,占分得菌株的80%,其次为D群,共有8株,占分得菌株的17.78%,A群的共有1株,占分得菌株的2.22%。5.应用K-B法对分离得到的菌株进行了22种临床常用抗菌药物的耐药性分析,结果显示分离菌株具有高水平的广谱耐药性。有37.78%的菌株对15种以上的抗生素具有耐药性。分离的菌株较敏感的抗生素包括丁胺卡那霉素,多粘菌素B,呋喃妥因。二.基因缺失菌株的构建选择分离菌株中优势血清型的强毒菌株—孝感株(ACN003)作为基础菌株,以同源重组的方法构建基因缺失菌株ACN003△iucB,筛选到的基因缺失菌株以小鼠体内感染试验确定其致病力,结果显示该菌株与亲本菌株相较毒力差异不明显。