猪瘟病毒(classical swine fever virus;CSFV)E2囊膜糖蛋白是猪瘟病毒的主要结构蛋白之一,是猪瘟病毒中和抗体的主要靶标,是抗猪瘟病毒感染的主要保护性抗原;因此,猪瘟病毒E2蛋白是开发猪瘟新型疫苗、诊断试剂及研究猪瘟病毒致病机理的重要蛋白分子。 利用TRIzol试剂提取猪瘟病毒兔化弱毒疫苗(C株)的基因组RNA,经反转录获取其cDNA,再以cDNA为模板,扩增编码E2蛋白主要抗原区的DNA片段(378bp),再将扩增产物正确插入到原核表达载体pPROEX-HTb中,得到重组质粒pPROEX-tE2,然后以其转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,高效表达出了带有组氨酸标签的截短的重组蛋白(tE2),占细菌总蛋白的35%。经Western blotting分析和间接ELISA检测,该重组蛋白能被猪瘟病毒抗血清所识别。 用IPTG大量诱导重组质粒pPROEX-tE2转化菌后,通过亲和层析柱纯化重组蛋白tE2,以纯化的tE2蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,然后取抗体转阳免疫小鼠的脾淋巴细胞,以PEG与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过3～5轮的筛选和纯化,最终获得一株能稳定分泌抗CSFV E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经鉴定,该株单克隆抗体能够与CSFV C株和石门株特异性结合,且识别CSFVE2蛋白上的一个线性表位;该单克隆抗体重链为IgG1亚型,轻链为κ型。 总之,本研究利用原核表达系统高效表达了CSFV E2蛋白的主要抗原区,然后以该重组蛋白作为免疫原制备了一株能够稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,为以后建立猪瘟诊断方法和研究CSFV E2蛋白的结构与功能提供了材料。